低能N+离子注诱变的凤仙花突变体组织培养及其诱变机制分析.pdf

j 11111 I[111 II IIII IIIII Y1 960727 摘要 balsamineL．)属凤仙花科凤仙花属，是我国各地广泛分布的一 凤仙花(Impatiens 种多年生常绿草本花卉。常见凤仙花多为单色，单瓣较多，重瓣花型简单，且花多为叶 腋处着生，大大限制了凤仙花作为常规观赏花卉的充分开发利用。离子注入作为一种诱 变技术已经在多种园艺植物的性状改良上获得了成功，通过合适剂量的低能N+离子注 入凤仙花的不同器官，可在诱变的后代中选育出更为符合需要的新品系。。但是对于低能 离子诱变的风仙花的快速组织培养及快繁体系的建立以及突变机制的分析鲜见报道。本 项目以低能盯离子束诱导获得了稳定的粉色和红色风仙花突变体为材料，利用组织培 养技术初步建立了凤仙花突变体体细胞快繁体系。同时采用ISSR、RAPD分子标记技术 对风仙花的突变体和对照株的核基因组DNA标记进行扩增并克隆测序，并分析揭示低 能旷离子注入引起的凤仙花基因组变异机制。研究取得的主要结论如下： 1、初步建立了凤仙花组织培养技术体系。确定了下胚轴诱导愈伤组织形成及继代 2．5 2．0 的培养基为：MS+6．BAmg／L+NAAmg／L+3％蔗糖+O．5％琼脂；愈伤组织分化芽 MS+6．BA0．2 0．05 的培养基为：1／2 mg／L+NAAmg／L；愈伤组织分化根的培养基为：MS+ NAAO．5 mg／L+2．5％蔗糖十0．5％琼脂；经炼苗后移栽，初步获得了快繁幼苗。 2、建立了凤仙花的ISSR反应体系，并将突变体和对照植株基因组进行了ISSR扩增， 将获得的特异条带进行了克隆和测序分析。结果发现，从121条ISSR弓]物中筛选出了6 条可以稳定扩增出特异条带的引物，引物多态性为4．96％，共扩增出46条特异带，其中 红色突变体有18条，粉色突变体有28条。在克隆的红色凤仙花的ISSR条带中，共有55 个位点发生了碱基突变；在克隆的粉色凤仙花的IsSR条带中，共有71个位点发生了碱基 突变。对特异条带进行了克隆和测序，序列分析发现：红色诱变和粉色诱变的碱基变异 的类型均包括碱基的转换、颠换、缺失、插入四种。在红色突变体中，碱基置换的频率 也显著高于碱基插入和缺失的频率(23．95％)，而在碱基置换中，转换的频率(39．44％) 接近颠换频率(36．62％)。通过对其碱基突变次数的研究，发现红色凤仙花突变体腺嘌 较高的辐射敏感性；而粉色风仙花突变体中胸腺嘧啶(T)共发生27次突变，占总突变 ’ 的辐射敏感性。 增，将获得的特异条带进行了克隆和测序分析。结果发现，从208条RAPD引物中仅筛选 出了6条可扩增出稳定特异条带的引物，其引物多态性仅为2．89％。共扩增出35条特异带， 其中红色突变体和粉色突变体中分别为16和19条。在克隆的红色凤仙花突变体中，共有 60个位点发生了碱基突变；在克隆的粉色凤仙花突变体中共有53个位点发生了碱基突 变。对特异条带进行了克隆和测序，序列分析发现：红色诱变和粉色诱变的碱基突变类 型均包括碱基的转换、颠换、缺失、插入四种。在红色突变体中，碱基置换的频率(73．33％) 的2．43倍。通过对其碱基突变次数的研究，发现红色凤仙花突变体腺嘌呤(A)共发生 26次突变，占总突变数的43．33％，说明腺嘌呤(A)对低能Ⅳ离子具有较高的辐射敏感 相一致。 发现，低能N+离子注入引起凤仙花基因组发生了碱基转换、颠换、缺失和插入突变。总 出现次数无显著差异，A／T颠换频率占到总颠换频率的47．06％，显著高于其它颠换类型。 在插入和缺失突变中，四种碱基均出现频率较低的变异。因此，低能N+离子注入主要引 起凤仙花基因组发生了单碱基置换。 关键词：凤仙花，低能矿注入，组织培养，ISSR，RAPD，诱变效应 n ABST