冬小麦东农冬麦号抗寒生理特性及抗寒基因的克隆.pdf

L●-■—一 』，fJ， 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………．I 英文摘要……………………………………………………………………………………IH 1．弓I言……………………………………………………………………………………………………………………l 1．1植物抗寒性及小麦抗寒研究进展……………………………………………………l l-1．1植物抗寒研究进展………………………………………………………………l 1．1．2小麦抗寒性研究进展…………………………………………………………。5 1．2半定量RT-PCR………………………………………………………………………。8 1．2．1 RT-PCR体系优化………………………………………………………………。9 1．2．2半定量RT-PCR在植物中的应用………………………………………………．10 1．3研究的目的及意义…………………………………………………………………………。lO 2．材料与方法………………………………………………………………………………12 2．1试验材料……………………………………………………………………………12 2．1．1植物材料………………………………………………………………………．．12 2．1．2试验仪器…………………………………………………………………………12 2．1．3主要试剂的配制和RT-PCR引物………………………………………………13 2．2试验方法……………………………………………………………………………14 2．2．1生理生化指标测定方法………………………………………………………．14 7 2．2．2半定量R-T_PCR…………………………………………………………………l 2．3技术路线……………………………………………………………………………．21 3．结果与分析…………………………。…………………………………………………22 3．1各取样时期麦苗形态比较…………………………………………………………．22 3．2越冬期间小麦生理生化变化………………………………………………………23 3．2．1细胞透性的变化………………………………………………………………．23 3．2．2丙二醛含量的测定……………………………………………………………．26 3．2．3脯氨酸含量的变化……………………………………………………………．．28 3．2．4叶绿素含量的变化…………………………………………………………………30 3．2．5超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化………………………………………．30 3．2．6过氧化物酶(POD)活性的变化………………………………………………32 3．2．7过氧化氢酶(CAT)活性的变化……………………………………………。34 3．2．8可溶性蛋白含量的变化……………………………………………………：…．36 东北农业大学理学硕士学位论文 3．2．9可溶性糖含量的变化…………………………………………………………38 3．3半定量RT-PCR……………………………………………………………………．39 3．3．1总RNA的检测……………………………………………………………………39 3．3．2第一链cDNA质量的鉴定及浓度调整………………………………………～40 3．3．3 DNA干扰排除……………………………………………………………………．40 3．3．4半定量RT-PCR结果………………………………………………………………4l 3．3．5序列同源性分析…………………………………………………………………………．43 4．j寸论…………………………………………………………………………………………………………………．52 4．1冬小麦抗寒的生理生化特性………………………………………………………52 4．2