冬眠和非冬眠蝙瘦素蛋白的结构与功能研究.pdf

论 文 摘 要 kDa，通过与 瘦素(1eptin)是一种由脂肪细胞分泌的激素类蛋白，分子量约为16 下丘脑下端的瘦素受体结合，激活下游酪氨酸蛋白激酶(Janus transducersandactivators 号转导物及激活剂(signal 制机体摄食和调节能量代谢，控制机体能量代谢平衡。有研究表明，瘦素在哺乳动物冬 眠过程中具有重要调控作用。本研究中我们分别选择一种冬眠蝙蝠马铁菊头蝠 ferrumequinum)和一种非冬眠蝙蝠棕果蝠(Rousettus (Rhinolophus 验材料，调取两种蝙蝠瘦素基因全长序列；随后，将瘦素基因编码区克隆至表达载体转 入大肠杆菌中，在离体情况下实现了两种蝙蝠瘦素蛋白质的原核表达、纯化，通过 SDS．PAGE实验、免疫印记实验和生物活性实验对所得到的瘦素蛋白进行了验证，并比 较了两种瘦素蛋白在氨基酸序列、同源模拟的3D蛋白结构以及离体条件下生物活性的 差异。实验中发现：(1)冬眠蝙蝠瘦素蛋白与非冬眠蝙蝠相比，其氨基酸序列相似度较 低；同时，冬眠蝙蝠瘦素蛋白与其它非冬眠哺乳动物相比，其氨基酸序列相似度也较低。 (2)与非冬眠蝙蝠相比，冬眠蝙蝠瘦素对前脂肪细胞(3T3一L1cells)具有更强的生长 site 马铁菊头蝠由疏水性的甲硫胺酸变为亲水性苏氨酸，而瘦素的受体结合域三及瘦素蛋白 121位点是启动下游信息传导的重要区域。非冬眠蝙蝠瘦素与人瘦素一样，在受体结合 域三位置的结构是随机坏(random 研究初步证明了冬眠动物瘦素蛋白和非冬眠动物的瘦素蛋白具有不同的氨基酸序列、蛋 白空间结构以及生物活性，为进一步深入研究瘦素在冬眠过程中的具体作用机制打下了 基础。 关键词：冬眠；蝙蝠；瘦素；同源建模 ABSTRACT 16-kDahormone mature Leptin，a via of producedby adipocytes，acts leptinreceptor to thefood hypothalamus and regulate intake，energyexpenditure adiposity．I．eptinreceptor initiates Janus (OB-R)mainlysignalsby transducersand activatingkinases(JAK)andsignal activators of numerous transcription(STAT)onresiduesofOB—R tyrosine during leptin hasbeenshownto all rolein stimulation．Leptin playimportant of