冬虫夏草菌菌丝提取物对LPS诱导的炎症反应的抑制作用.pdf

论文题目：冬虫夏草菌菌丝体提取物对LPS 诱导的炎症反应的抑制作用 学科专业：微生物学 学位申请人：何莉 指导教师：杨晓彤 中文摘要 本研究通过建立脂多糖（LPS）刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7 的炎症模 型，从体外研究冬虫夏草菌丝体——中国被毛孢粗提取物的抗炎作用，并对其抗 炎机理做初步探索，为进一步体内研究，临床研究和医药应用提供理论和实践依 据。同时也为冬虫夏草菌丝体的市场开拓提供参考。 本文采用 MTT 法测定冬虫夏草菌丝体水提物和乙醇提取物以及乙醇提取物 的分级提取物——石油醚提取物，氯仿提取物，乙酸乙酯提取物以及提取物残渣 在一定浓度范围内对细胞的毒性作用，并以此样品浓度为依据，用 Griess 法测 定样品对脂多糖刺激下小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7 产生的一氧化氮（NO）的 影响，采用免疫印迹法（Western Blot ）检测冬虫夏草水提物对脂多糖刺激下细 胞产生的一氧化氮合酶（iNOS ），环氧化酶（COX-2）作用的时效关系和量效关 系。并用免疫印迹法研究冬虫夏草水提物对脂多糖刺激下细胞产生的 p38 蛋白 （MAPK 信号通路）和p56 蛋白（NF- κB 信号通路）的作用的时效关系和量效 关系。 研究结果表明：冬虫夏草水提物与乙醇提取物的各个浓度（500,250,100,10 μg/mL ）对巨噬细胞无细胞毒作用，并对于脂多糖刺激下小鼠腹腔巨噬细胞产 生的一氧化氮有下调作用，并具有量效关系。乙醇提取物的分级提取物中浓度为 100 μg/mL 时，四种提取物及提取物残留对 LPS 刺激下的 RAW264.7 产生的 NO 有下调作用。其中以氯仿提取物的下调作用为最强。浓度为 10 μg/mL 时， 只有氯仿提取物对NO 有下调作用。以冬虫夏草水提物为样品研究iNOs 蛋白发 现浓度为 100 μg/mL,作用时间为6h 时，样品对iNOs 的下调作用最强（相对于 12h，24h ）；在一定浓度范围内（25,50,100 μg/mL ）,样品均可下调iNOs 的产 生并呈现量效关系。以冬虫夏草水提物为样品研究COX-2 蛋白发现浓度为100 μg/mL,作用时间为 12h 时（相对于6h，24h ），为样品对COX-2 的下调作用 最强；在一定浓度范围内（50,100 μg/mL ）,样品均可下调COX-2 的产生并呈 现量效关系。以冬虫夏草水提物为样品研究p38 蛋白发现浓度为100 μg/mL， 样品对p38 的量没有影响，处理时间为15min 时， p-p38 的下调作用最强（相 对于30min ）；在一定浓度范围内（25，50,100 μg/mL ）,样品对于p38 没有影 响，均可下调p-p38 的产生并呈现量效关系。 综上所述，冬虫夏草菌丝体提取物具有明显的体外抗炎作用。 关键词：冬虫夏草菌丝体提取物;LPS 炎症模型;小鼠腹腔巨噬细胞;炎症因子 Abstract The study is based on the inflammation model in which lipopolysaccharide (LPS) is used to stimulate mouse peritoneal macrophage RAW264.7. It studies the in vitro inflammation effects of extracts from Ophiocordyceps sinensis which is proved to be the real anamorph of precious traditional Chinese herbal medicine——Cordyceps. Meanwhile, the anti-inflammation mechanism of aqueous extract is pilot studied. This research provide theoretical and practical ba