几种常用实验动与人肠道主要菌群多样性比较.pdf

摘要 曼舅舅曼量量量舅曼量量曼量置III II Ill =,曼曼皇曼舅 几种常用实验动物与人肠道主要菌群 多样性比较 动物学专业硕士研究生李伟 指导教师：魏泓教授 摘要 人类是由10％的人体细胞和90％的微生物细胞共同组成的“超级生物体”1。 人的肠道中栖息着大约1014个，1000多种微生物，是人和动物体最庞大而复杂的 生物群落，其主要分为与宿主共生的生理性细菌(类杆菌、双歧杆菌属、拟杆菌 等)，与宿主共栖的条件性致病菌(肠肝菌、肠球菌等)以及大多数为过路菌的病 原菌(变形杆菌、霍乱弧菌、痢疾杆菌等)，主要分布在结肠部位，正常情况下肠 道菌群保持着共生和拮抗关系，从消化、营养吸收、能量供应、脂肪代谢、免疫 调节、药物代谢和毒性等诸多方面影响人和动物的健康状况2-5。 对于肠道微生态的研究，传统的方法是通过微生物的选择性培养，或者是通 过直接形态学观察来获得部分信息，再进行鉴定和分类。传统培养方法的局限性 在于培养过程费时费力，易受操作方法的影响，敏感度低，大多数微生物很难或 不能用现有的技术分离培养；培养技术只能定性检测可培养的细菌，不能鉴定未 知的细菌，不能正确的反映肠道微生物群体的数量和多样性，使人类不能全面了 解肠道微生物之间和与宿主的相互关系，阻碍了人类对肠道微生物的认识。近年 来，随着分子生物学技术的迅猛发展，分子生物学技术在微生态学中的应用也日 益广泛，其特点是能够快速获得微生物种群定性、定量数据，这使得微生态学现 有的研究范围得以进一步扩展。以16SrRNA基因为基础的变性梯度凝胶电泳 (denaturinggradientgel 境或人工环境中的微生物种群，并进行复杂微生物群结构演替规律研究，以及生 物种群的动态分析6。特别是近几年来国内外学者采用不同的分子生物学方法对细 菌的16S rRNA进行研究，已经得到了广泛的16S rRNA序列数据库，为我们进行 该比较微生态的研究提供了基础。 目前用于肠道微生态研究的实验动物主要是用大／小鼠来建立的，其优点是个 体小、易于操作、繁殖速度快、价格便宜等等，但是啮齿类动物在解剖、生理和 代谢等方面与人之间存在较大的差异，在肠道微生态研究上并不能很好的作为模 型动物，而就生理学、解剖学和营养代谢等方面小型猪与人更为相似，并且人的 两南夫学硕十学伊论文 一些疾病如肝硬化，糖尿病、高血压和一些营养代谢症等在其身上也有发生，目 前以小型猪作为实验材料的文章也越来越多。本研究利用PCR．DGGE技术对常用 巴马香猪、贵州小型猪与人的肠道总菌群、乳杆菌属菌群、拟杆菌属菌群进行了 肠道菌群的多样性、丰富度和均匀度以及UPGMA相似性聚类分析。 研究目的和意义 通过比较微生态的方法，间接和直接阐明几种常用实验小鼠、大鼠、小型猪 与人的肠道主要菌群在多样性的差异，正确反映它们作为常用模型动物与人之间 肠道菌群的差异和相似性，初步分析上述几种常用医学实验动物肠道菌群的特点 和差异，期望为肠道微生态研究提供基础性资料，以及在选择肠道微生态研究用 模型动物时提供参考依据。 研究方法 马香猪和贵州小型猪)和人的粪便样品，提取总菌DNA； 引物扩增提取到的肠道菌群总DNA、乳杆菌属菌群DNA和拟杆菌属菌群 DNA： 3．分组进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)； 4．对每张电泳胶上的条带，利用spssl3．0分析软件进行数据分析。 研究结果 利用PCR．DEEG方法，对两个品系小鼠，两种大鼠，两种小型猪，以及小鼠、 大鼠、小型猪与人之间肠道总菌群、乳杆菌属和拟杆菌属的多样性、丰富度和均 匀度分析，结果显示各种属内没有显著性差异，在种属间存在显著性差异，从肠 道菌群同源性分析，小鼠、大鼠、小型猪的肠道总菌群、乳杆菌属菌群与人的比 较，小型猪肠道菌群与人的最为接近，拟杆菌属比较实验动物之间比较接近。 关键词：实验动物肠道菌群多样性PCR．I)GGE Abstract 量曼曼