夏枯草三萜类的癌化学预防机制研究.pdf

摘要 摘要 肺癌的发生及死亡率居各类恶性肿瘤的首位。由于肺癌不易早期发现及治疗的高难 度，因此，预防肺癌的发生，对降低肺癌发生率及死亡率具有举足轻重的作用。中医的 “治未病”预防疾病思想与现代医学中的化学预防异曲同工，其目的均是用药物减少肺 癌的发生率。夏枯草PrunellaL．为唇形科植物，性苦寒，具清热解毒之功效， vulgaris 其成分主要包括三萜类、酚酸类、黄酮类、多糖等成分，具有确切的防治肺癌疗效，在 临床上广泛使用。 Nr￡2／ARE信号通路是干预癌症发生的重要信号通路，它对细胞抵御外源有害物质 以及氧化应激有着重要作用。本课题研究以中医药治未病思想为指导，以夏枯草为模型 药物，引进、消化再创新，通过Nrf2信号通路，从整体动物水平、细胞水平、分子蛋 白水平，研究夏枯草防治肺癌的物质基础及其作用机制。主要内容： 1．三萜类组分的富集分离 提取不同批次的夏枯草三萜，然后利用大孔树脂得到三萜类成分，建立人肺腺癌细 胞A549、SPC．A-l体外药效筛选体系，对夏枯草进行了活性筛选评价，结果显示江苏 278．1 7，356．73}lg／mL· 2．夏枯草三萜化学预防肺癌的模型建立 ①人肺癌细胞模型的建立： 胞对夏枯草更为敏感。结果表明所建立的细胞模型能有效地应用于活性筛选。 ②人正常支气管上皮细胞模型的建立： Human 建立人正常支气管上皮细胞Normal bronchial cells(NHBE)的体外 epithelial 药效筛选体系，采用MTT法，以细胞增殖抑制率为指标，评价夏枯草三萜抗肺癌的效 的抑制作用较肺癌细胞小。建立的生物化学预筛体系能有效筛出潜在的防治药物。 ③香烟烟雾提取物诱导的NHBE细胞模型建立： 建立香烟烟雾提取物诱导的NHBE细胞模型．实验结果表明，NHBE细胞在10％ 夏枯草兰萜类的肺j帑化学预防机制研究 Ⅻ幡E有毒害作用，随浓度增加而增大。结果表明所建立的模型能反映夏枯草减少诱导 物的损伤。 ④整体动物模型的建立： 建立了KM小鼠模型，实验结果表明，夏枯草可以显著提高KM小鼠体内II相解 倍； 建立裸鼠模型，实验结果表明，夏枯草可以显著降低裸鼠的瘤大小，抑瘤率：夏枯 草高剂量组89％，夏枯草低剂量组68％； 建立M小鼠模型，结果表明，夏枯草可以显著降低M小鼠肺部肿瘤数，提高 A／J小鼠的脾脏指数，与对照组比均有显著性差异(FO．05)。结果表明所建立的整体动物 模型能客观地反映夏枯草预防肺癌的活性。 3．夏枯草三萜类化学预防肺癌的机制研究 ①夏枯草对NHBE细胞中II相解毒酶活力及Nrf2蛋白表达的影响： 蛋白表达。结果表明夏枯草可以提高肺正常细胞NHBE中的II相解毒酶活力及表达， 提高对外界刺激的抵御。 (至)siRNA研究Nrf2信号通路在夏枯草三萜保护细胞中作用： 有明显的细胞保护作用，表明夏枯草三萜是通过Nrf2信号通路起保护细胞作用。 ③夏枯草对香烟烟雾提取物细胞模型中II相解毒酶活力及Nr／2蛋白表达的影响： 摘要 活力升高为对照组的1．75：L-0．042倍，NQ01活力升高为对照组的2．14士0．037倍， 性差异po．05)。 ④熊果酸对香烟烟雾提取物细胞模型中II相解毒酶活力及Nrf2蛋白表达的影响： 果表明熊果酸是夏枯草三萜中有效成分之一。 4．夏枯草三萜类对肺癌细胞中Il相解毒酶活力及Nrf2蛋白表达的影响： 草可以降低肺癌细胞A549中的II相解毒酶活力及表达，降低对外界刺激的抵御。 结论：不同产地、不同品种夏枯草属药材其内在的药效物质基础存在本质区别。夏 制率约为30％，而加入125pg／mL夏枯草三萜会使抑制率降低至80％，说明夏枯草具有 细胞保护作用。夏枯草三萜可以显著减少苯并芘诱导的A／J小鼠中肺部肿瘤数，在裸鼠 模型中，夏枯草三萜可抑制肿瘤发展，夏枯草三萜在KM小鼠内可以刺激II相解毒酶 表达及活力，GSH含量，且呈现出量效关系，而在NHBE细胞中则反之。熊果酸可以 损伤，可能是夏枯草具有细胞保