多氯联苯对小鼠睾的毒性效应及机制的研究.pdf

摘要 多氯联苯(Polychlorinatedbiphenyls，PCBs)是最难以降解的持久性有机污 染物之一。有关PCB的生殖毒性效应及机制已开展了较多的研究，但PCB对附 睾的毒性效应及机制还不清楚。本研究以C57BL／6品系青春期雄性小鼠为研究 对象，以商品化的Aroclor1254为PCB代表，研究环境水平的PCB暴露(0．5、 5、50和500 I．tg／kg)对附睾的毒性效应及机制。 青春期雄性小鼠在Aroclor1254暴露50天后，其体重、睾丸和附睾重量没 有显著性变化，精子密度、精子活力以及顶体酶活性呈现剂量依赖性下降，精子 畸形率呈现剂量依赖性上升。血清中的雌激素水平表现出剂量依赖性的下降，雄 激素的水平没有表现出显著性的变化。Westernblot检测的结果显示：附睾中的 雌激素受体a(Es仃ogenreceptora，ERa)和雌激素受体p(Earogenreceptor13， ERa)并无显著性变化，而雄激素受体在500 I．tg／kg组表现出显著性下降，提示 Aroclor 1254对附睾表现出抗雄激素效应。 利用eDNA微阵列(Microarray)技术研究附睾头部在低浓度(5ttg／kg)和 高浓度(500 1254暴露下基因的差异表达，结果显示：共筛选出。 ttg／kg)Aroclor 2350个差异表达基因，其中低浓度组引起附睾头部572个基因的差异表达，包 括上调基因212个，下调基因360个；高浓度组引起附睾头部1769个基因的差 异表达，其中上调基因433个，下调基因1336个。应用实时荧光定量PCR (Real-timefluorescent PCR，Real-timePCR)对部分差异表达基因进 quantitative 行了mRNA水平的验证，结果证明了芯片检测的可靠性。进一步应用分子注释 系统(MoleculeAnnotation Annotation 基因信息和功能以及所参与的信号通路进行挖掘和注释，得到差异基因中最为显 著的功能类别和信号通路，其中涵盖了GTP结合、核小体组装、能量代谢、RNA 加工等方面。为进一步探索PCB对附睾的毒性效应机制提供了依据。 根据功能注释聚类的结果，发现与GTP结合相关的基因在高浓度Aroelor score)，表明相关基因的表达变化 1254暴露后表现出最高的富集度(Enrichment IX 是Aroclor1254暴露作用于附睾表达谱的最显著的效应之一。MAS分析表明相 关基因的功能包括了紧密连接和肌动蛋白细胞骨架的调控。Westernblot检测表 露后表现出显著性的下调。小GTP结合蛋白通过调节肌球蛋白调节轻链(Myosin regulatorylight 纤维的收缩和肌动蛋白聚合的稳定性。Westernblot结果表明MRLC磷酸化水平 上升而Cofilin磷酸化水平下降，提示紧张纤维的收缩加强、肌动蛋白聚合的稳 定性增加。 小GTP结合蛋白表达的变化和纤维的收缩加强提示紧密连接功能的改变。 Westernblot结果表明紧密连接的组成蛋白(胞质紧密粘连蛋白1)ZO．1在500 PCB暴露下表现出显著性的下调。免疫组化结果表明定位与细胞顶端连接 I-tg／kg 的ZO-1染色并没有明显的变化。免疫共沉淀的结果表明，Occludin的酪氨酸磷 酸化的水平上升。电镜下的硝酸镧示踪提示紧密连接的透过性增加。紧密连接的 透过性关系到精子成熟环境的维持，PCB暴露对紧密连接的影响提示了PCB对 生殖毒性的新机制。 对低浓度和高浓度都能够显著性诱导的差异基因进行基因分类学注释 (Gene space或 Extracelluar 进行蛋白表达水平的验证。将Psap表达水平与精子指标和肝脏中的PCB浓度建 立相关性，结果表明Psap表达与PCB浓度以及精子畸形率负相关而与精子活力 正相关。提示Psap可能作为PCB暴露和雄性生殖毒性的候选标志物。 关键词：多氯联苯，附睾，生殖毒性