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多选择标记植物表达载体的构建 摘要 用多选择标记植物表达载体侵染植物后，通过载体上的选择标记对 植物遗传转化后的目的基因进行检测是监测功能基因、提高作物品种的 多样性和适用性的常用做法。本研究以植物表达载体pC舳认1301为 受体，克隆外源片段可溶性的红移绿色荧光蛋白(．s，艘Ⅸ聊)基因、抗除草 此载体上，构建出含s，搬册、6钟、p-葡萄糖苷酸酶(G㈣及潮霉素㈣力 抗性基因的多选择标记载体。然后，从玉米中克隆出小热激蛋白㈣) 连接到6刃基因下游C心Ⅳ35S启动子上，使此载体含4个标记基因后， 还携带一个功能基因。不仅在大肠杆菌，农杆菌中检测了s，破卿基因， 还在玉米中初步检测了各种标记基因及胡印基因的表达。本研究得出以 下结论： (1)绿色荧光蛋白基因构建此载体上后，得到的载体 干亲本昌7．2，群体自交系YQ7．96中都能表达出绿色荧光； YQ7．96，用潮霉素和除草剂共筛选玉米得到了存活植株，表明此载体中 的6刀和抗潮霉素基因都能在玉米中表达； 上的这两个基因也能顺利表达。 此载体的成功构建为多种基因的筛选检测提供多标记载体，使筛选 检测具有简便性和广泛适用性。多选择性标记不仅可以降低植物遗传转 化假阳性的几率，还可以根据具体实验条件和需求筛选检测，从而有效 降低筛选成本和节省筛选时间。同时，此载体不仅可以在不破坏载体本 身特性的前提下，利用导入的6刀基因下游C心Ⅳ35S启动子连接检测 目的基因，还能进行同一个启动子下目的基因和荧光基因的融合表达， 同时针对各个标记基因的特点本着高效，简便，易行的原则采取的检测 方法具有很强的独创性。含此印基因的载体构建成功，并进行检测后， 不仅使得载体拥有的标记基因的检测效果得到验证，还验证了一个功能 基因。该载体的以上优势都利于该载体在具体实践中广泛推广。 关键词 小热胁迫蛋白选择标记绿色荧光蛋白表达载体 CoNSTRUCTIoNoFPLANTEXPRESSIoN VECToRS WITH MUIJI．SELECTABLEMARKER ABSTRACT Multi—selec诎lem破er Vectorisusedtomonitor plantexpression plant transfomlationhasa iIl with genetic good potentialcropbreedi工lgm甜1y exceⅡent traitsandthe of agronomiC detection targetgenes．Takillgplant Vector 13O1 aS of eXpression pCAMBIArecipients，丘agments exogenous solublered fluorescent Basta shiR铲een protein resis伽1cema呔er bara11ddowns仃eam ofa CaMⅣ35S gene promoterplant were t0 clonedmisVector．TheVecto