小鼠植入前胚胎NA甲基化模式比较及Dnmts启动子功能分析.pdf

II l I II II I IIIII r IIIII —————————————堕里——————一|IIll !Y2114447 摘要 为考查体外受精、操作及培养环境对体外受精的小鼠植入前胚胎全基因组 DNA甲基化模式的影响，本研究以体内受精的植入前胚胎作为对照，采用间接免 疫荧光法检测小鼠体内外受精植入前胚胎基因组DNA甲基化模式。实验结果表明： 体外受精各期植入前胚胎呈现出与之相应时期的体内受精植入前胚胎不同的DNA 甲基化模式和水平，原核期甲基化水平较高，2．、4．、8．细胞期明显降低，而桑葚 胚和囊胚期又略有升高。各期体外受精植入前胚胎的基因组DNA甲基化水平都比 同时期体内受精胚胎的甲基化水平低。本实验结果部分显示了体外受精、操作及培 养环境可能对正常的DNA甲基化模式产生了影响，造成了体外受精植入前胚胎甲 基化模式异常。作为基因表达开关的启动子是开启基因表达的重要顺式元件，可以 受到反式因子的调控进而启动或关闭基因的表达。在本研究中，我们克隆小鼠 HEK293细胞，通过双荧光素酶报告基因检测系统检测重组质粒荧光素酶报告基因 的相对活性，考查转录因子对甲基化转移酶启动子活性的影响。研究结果表明：五 较强。对Dnmt3a启动子各5’缺失片段的活性仍然是起到抑制作用，但不同的的 转录因子对Dnmt3a启动子各5 段之间；Sox2对Dnmt3a 4个启动子片段的抑制作用区别不明显。5种转录因子对 Dnmt3b．2、3启动子片段活性有较强的促进作用，其活性是对照组的7倍以上，但 是转录因子对Dnmt3b．1、4启动子片段活性几乎没有任何作用，其荧光素酶活性与 对照组相当。 关键词：昆明小自鼠，甲基化，启动子活性分析，基因克隆，重组质粒构建， 共转染 I Abstr孔t Abstract Inorderto theinfluencesofinvitro and investigate cultureenvironmentIVF 011mouse DNA embryos，the preimplantation methylation inrive of fertilizationandIVFmouse were patterns preimplantation embryos immunefluorescencewithan investigatedby staining antibodyagainst vivofertilized as the 5-methylcytosine(5-MeC)．Using／npreimplantationembryos control，we DNA ofinvivo