小鼠视网膜片层及神经干细胞增殖与分化的研究.pdf

摘要 外界信息大多是由视觉系统接收、处理和感知的。而视觉信息先在视网膜中进行初 步处理再传导给大脑。视觉信息传递的通路是通过视网膜中各种神经元之间的突触进行 传递的。视网膜神经元的轴突汇聚成视神经，它们以动作电位的方式将视觉信息传送至 数个履行各种功能的大脑结构区域。视觉信息最为直接的通路是由光感受器通过双极细 胞至神经节细胞的传递。水平细胞接收来自光感受器的输入，并通过侧向轴索影响周围 的双极细胞和光感受器。无长突细胞接受双极细胞的输入，并通过侧向投射影响周围的 神经节细胞、双极细胞和其他的无长突细胞。眼的发生是一个多因素参与的复杂的过程， 发育过程中各细胞是严格按照特定的时空模式表达和相互作用的¨1。先由视杯发育为胚 眼，再逐渐发育出视网膜各层细胞。所有类型的细胞都是由神经干细胞分化而来的，神 经干细胞在不同发育时期具有不同的增殖特点和功能特性，这也是形成片层化结构的重 要因素之一。由于视网膜的上述特殊功能，对视网膜的研究一直是神经生物学中的热点。 目的：通过观察小鼠视网膜的形态结构来探索视网膜的发生及片层化过程；研究小 鼠视网膜中双极细胞的发育过程及其与视网膜片层化过程的关系；观察小鼠视网膜神经 干细胞的增殖与分化过程。 方法：本实验应用免疫荧光、BrdU检测技术和苏木精一伊红染色法染色法对胚胎期 及出生后小鼠视网膜形态结构及神经干细胞的增殖、分化进行观察，并对视网膜BrdU 和PKC—Q阳性细胞密度进行统计。 结果：①小鼠在胚胎E10时出现视杯，视网膜片层化是从E13时开始，先分化出色 素上皮层和神经母细胞层，胚胎时期从神经母细胞层中分化出神经节细胞层和内网层。 视网膜的片层化主要在出生后形成，出生后神经母细胞层逐渐分化出感光细胞层、外核 层、外网层和内核层，至小鼠睁眼时基本分化完全，形成视网膜十层结构。@BrdU可以 特异性标记处到增殖状态的神经干细胞，BrdU阳性细胞在胚胎期视网膜中密度最高随后 逐渐减少，经统计分析发现，视网膜干细胞在胚胎时期数量逐渐增多，到出生当天数量 达到最大值，出生后，神经干细胞开始分化，数量逐渐减少。所以，小鼠视网膜干细胞 在胚胎期大量增殖，而出生后神经干细胞增殖速度放慢并逐渐分化为各类细胞。@PKC— a是小鼠视网膜中双极细胞的特异性标记物，本实验观察到PKC-Q的阳性细胞从P5时 I 形态结构趋向稳定，双极细胞发育完全。随着年龄的增长，到P70以后，PKC-Q阳性细 胞密度降低，双极细胞逐渐退化。 结论：①小鼠视网膜的片层化是以神经母细胞层为基础逐渐发育形成的，在出生前 仅发育出色素上皮层、神经母细胞层和神经节细胞层，小鼠在出生时视网膜尚未发育完 全，出生后是视网膜细胞分化的高峰期，P0到P14期问视网膜形成片层化结构，发育完 全。在视网膜发育成熟之前，小鼠尚未睁开眼睛，视网膜的片层化过程与其功能的成熟 相一致。②视网膜片层化的过程也是细胞增殖、分化的过程。分化出的细胞要迁移至成 熟位置，也就形成了视网膜的片层化结构。小鼠视网膜的神经干细胞在胚胎时期大量增 殖，为出生的细胞分化做准备。在出生后前期是分化的高峰期，逐渐分化为不同类型的 细胞。而PIO以后仅在睫状体处存在神经干细胞，这可能与成年以后的视网膜自我修复 功能相关。 关键词： 双极细胞：分化；神经干细胞；增殖；视网膜 ABSTRACT Outsideinformationare and thevisual visual received、processingperceptionby system．The informationis intheretinaandthentransmittedtothebrain．Visualinformation preliminaryprocessing transmissionis the betweenretinaneurons．Retinal pathpassedthroughsynapses axons tothe