幽门螺杆菌HsA及CTB-HspA融合蛋白在家蚕中的表达与免疫效果研究.pdf

摘要 摘要 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是主要定植于宿主胃和十二指肠粘 液或粘膜处的一种重要致病菌，与多种胃病及十二寸旨肠疾病有密切关系。Hp是 一种全球范围的人类致病菌，世界上约有50％以上的人口感染此病原菌，我国 目前约有50％～80％的感染人群，它是目前所知的人类感染率最高的感染菌之一， 对人类身体健康造成了严重的危害。现如今，针对此病原菌最常用的是联合质 子泵抑制剂和两种或三种抗生素的疗法，虽然该疗法有较好的疗效，但耐药性 增强、不良反应和高费用等因素使抗生素疗法面临严重的挑战；另外，该疗法 只针对有病症的患者，因此，如何在广大的人群中有效控制Hp的感染，避免其 诱发的一系列疾病的发生和发展，具有非常重要的意义。基因疫苗具有有效的 预防性和治疗性，有望成为控制Hp感染的最有效和最有前景的方法之一。 本研究选择Hp具有较强的免疫原性的热休克蛋白A亚单位(HspA)进行 抗原的免疫原性，Hp疫苗需配合免疫粘膜佐剂共同进行免疫试验，因此同时构 将构建好的重组质粒进行测序和序列同源性比较后发现，所得基因序列与 Genbank公布的序列有非常高的同源性。分别将两组重组菌进行诱导表达和鉴 定，结果表明，重组菌可成功诱导表达目的蛋白，且Western blotting鉴定结果 证实其具有良好的免疫原性；对表达蛋白利用Ni2+．N1A柱亲和层析及凝胶过滤 层析和阴离子交换层析等一系列纯化可得到纯度为90％以上的目的蛋白，将纯 化后的HspA抗原蛋白进行初步结晶条件的摸索，为Hp的防治奠定一定的结构 结合活性，为后续佐剂研究奠定基础。 同时，本研究利用重叠延伸PCR法成功利用(Gly4Ser)3连接肽序列构建了 级结构、抗原性和亲水性。利用Bac．to．Bac系统成功构建了重组杆状病毒 T 摘要 电泳和Westem blotting分析鉴定，结果表明目的蛋白在家蚕BmN细胞、五龄幼 虫和蚕蛹均成功表达。将表达有HspA抗原蚕蛹和CTB—HspA融合蛋白的家蚕蛹 等七组对ICR小鼠进行口服实验，ELISA检测口服免疫后血清的特异性IgG， 蛋白蚕蛹免疫组有良好共免疫效果，与对照组相比产生了较高水平的特异性抗 体(PO．01)，为今后进一步利用家蚕生物反应器制备低成本的Hp基因工程口 服疫苗奠定了一定的基础。 关键词：幽门螺杆菌，HspA，CTB，家蚕生物反应器．，口服免疫效果 II Abstract Abstract Helicobacter an that bacteria pylorifHp)isimportantpathogenic mainly colonizeinthemucusandmucosaof and duodenal，which patient’Sgastric highly related to isaworldwidehuman bacteriathat gastroduodenaldiseases．Hp pathogenic halfofthe has to50％-80％ofChinesesuffered populatininfected．Moreover,up fromthis bact