微波诱导催化玉淀粉水解的基础研究.pdf

摘 要 本研究在仅．淀粉酶和葡萄糖淀粉酶(简称糖化酶)共催化的基础上，引入微 波辐射，借助微波诱导催化强化淀粉水解反应。对微波辐射下整个淀粉水解反应 过程进行详细研究，并与传统的加热水解方式相比较。主要研究内容和结论如下： (1)研究微波诱导双酶催化玉米淀粉水解的最佳工艺条件。首先，考察pH 值、反应温度、底物浓度、酶制剂的用量、辐射时间及微波功率等因素对玉米淀 粉水解率的影响。结果表明，与传统的水浴加热相比，经微波辐射的玉米淀粉的 水解率均高于水浴加热20％以上；其次，运用正交试验法对微波诱导双酶催化玉 米淀粉水解的工艺条件进行优化。经极差分析与方差分析后确定的微波诱导双酶 催化玉米淀粉水解的最佳工艺条件为反应温度65℃，辐射时间30rain，酶制剂 的用量分别为Q．淀粉酶的用量90 U／g干淀粉，糖化酶的用量110 U／g干淀粉。 (2)研究微波诱导双酶催化玉米淀粉水解反应的动力学特性。考察经微波辐 射和水浴加热下不同因素对玉米淀粉酶水解反应初反应速率的影响。实验结果表 明该催化反应经微波辐射后的初反应速率在不同条件下均比水浴加热的要大，增 大幅度20％以上；采用实验方法求取了双酶的米氏常数Km和最大初反应速度 Vm，其中a．淀粉酶在微波辐射下的Km约是水浴的12倍，Vm约是水浴的14 倍，糖化酶在微波辐射下的Km约是水浴的10倍，Vm约是水浴的8倍，同时 指出反应产物葡萄糖对糖化酶的抑制作用经微波辐射后有所减弱。 (3)SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明，微波辐射没有改变a．淀粉酶和葡 萄糖淀粉酶的分子量大小，它们的一级结构没有发生改变，换句话说，酶蛋白的 肽键没有发生断裂，微波辐射对酶蛋白的一级结构没有造成影响，这是酶蛋白维 持活性的基本条件，有利于酶水解玉米淀粉反应的进行。 (4)a．淀粉酶的圆二色性(CD)及二级结构研究表明，分别经微波辐射和水浴 加热处理后的a．淀粉酶，其CD谱线在波长扣19311in处的峰高均降低，微波辐 射处理的峰高降低幅度在140％-220％之间，水浴加热处理的降低幅度在60％～ 140％之间；微波辐射处理时间为60rain时，持193Ilffl处谱峰消失，而水浴处理 60rain时在该处表现为一弱峰；在波长k=204nm和入砣20 niIl处的双负峰，处 理组的峰位都出现了蓝移变化，微波辐射下蓝移幅度在5,-一，8皿之间，水浴加热 下蓝移幅度在3～5衄之间；随着处理时间的延长，微波辐射和水浴加热均促使 二级结构0【一螺旋，B一折叠，p．转角和无规则卷曲之间的转化。糖化酶的圆二色性 和二级结构的研究表明，经微波辐射和水浴加热处理后的CD谱线，在波长护193 衄处的峰高的降幅在36．4％68．2％之间；在脚06衄和k=220nm的双负峰处， 蓝移的趋势，幅度在0．2--3nnl之间，而水浴处理下峰位变化不明显；随着处理 时间的延长，微波辐射和水浴加热均促使二级结构Q．螺旋，B．折叠，p．转角和无 规则卷曲之间的转化，但变化趋势有所不同。结论表明，微波辐射能影响肽链中 氢键的分布，导致氢键的松弛，断裂和重组，使原有维系酶蛋白二级结构的稳定 性的氢键取向发生改变，使酶蛋白结构稳定性降低，柔性变大，这为微波辐射的 宏观生物效应的作用机理提供了重要的理论依据。 (5)a．淀粉酶和葡萄糖淀粉酶经微波辐射和水浴加热处理后的紫外吸收光谱 有差异，这是微波辐射诱导酶蛋白三维结构的变化的结果，微波辐射能使酶的活 性中心暴露，利于酶的活性中心和底物分子的有效结合，提高酶的催化效率。 (6)分别经微波辐射和水浴加热处理后的a．淀粉酶和糖化酶，其酶活都发生 了变化。在水浴加热情况下，俚．淀粉酶酶活随加热温度的升高先增大后下降，60℃ 左右时酶有最大活性；糖化酶酶活随加热温度的升高先增大后下降，40℃左右时 min左右时酶 酶有最大活性；洳淀粉酶酶活随加热时间的延长先增大后下降，20 有最大活性，25rain之后酶的活性开始快速下降；糖化酶酶活随加热时间的延长 先增大后下降，15rain左右时酶有最大活性，20lain之后酶的活性开