急性缺血性脑损后Apelin神经细胞保护作用的实验研究.pdfVIP

急性缺血性脑损伤后Apelin神经细胞保护作用的实验研究 研究生：蔡世昌 专业：神经生物学 导师：白波 教授 张秋玲教授 中文摘要 目的 cerebral 大脑中动脉栓塞(Middle 血再灌注模型，利用apelin。13进行超早期干预治疗，观察大鼠急性局灶性脑缺血再 mI斟A表达的变化和细胞 灌注损伤后神经细胞凋亡发生率，caspase一3和caspase．12 内氧化应激的变化情况，检测新生神经细胞的数量；探讨apelin对急性缺血性脑中风 的神经保护作用及其可能的作用机制。 方法 1．实验动物分组：取清洁级Wister成年雄性大鼠48只，随机分成四组，每组 12只；分别为空白对照组(blank groupI组)；假手术对照组(sh锄group，II组)； 缺血再灌注组(ischemia reperfusiongroup， (ischemia with reperfusionapelingroup，I／R+A，Ⅳ组)。 2．动物模型的制备：按0．3m1／1009体重，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，分离右 侧颈总动脉(CCA)至颈总动脉分叉处，辨别并分离颈内动脉(ICA)和颈外动脉 (ECA)；结扎ECA远端，夹闭颈总动脉近心端和颈内动脉远心端。用自制处理过的 尼龙线从颈外动脉剪口处插入，经CCA进入ICA，以颈总动脉分叉处开始计算，进 线深度为18．O士O．5mm，行至大脑中动脉起始部形成栓塞，造成局灶性脑缺血状态。 缺血30mill／2h缓慢拔出尼龙栓子按预设时间再灌注后取材。 3．TTC染色：取各组手术成功大鼠行腹主动脉灌注TTC染色，取脑查看各组大 鼠脑梗死范围和程度。 内微量缓慢注射10“1apelin。 注射三天，最后一次注射完2h后取脑。 6．石蜡切片， Brdu染色，免疫组化检查新生神经细胞的表达情况。 caspase-3111：RNA，caspase．12mRNA，APJ表达的变化。 8．细胞凋亡测定：利用灿mexin V和PI双染确定凋亡细胞，以流式细胞仪统计各 组大鼠神经细胞凋亡数。 9．大鼠脑缺血后氧化应激功能的检测：取大鼠脑组织匀浆液，测定MDA浓度， 谷胱甘肽过氧化物酶浓度以及其总抗氧化能力。 结果 为模型制备合格动物，经TTC染色观察梗死灶明显，说明MCA0模型成熟稳定，可 进行下一步实验。 2．免疫组化检测结果显示：脑缺血再灌注后在大脑皮层、纹状体、侧脑室区、蛛 生细胞数量。 3．RT-PCR检测发现：单纯急性脑缺血再灌注后caspase．3mI矾A在大脑皮层表达 显著升高，caSpase-12 mRNA的 表达明显下调，而caspase．3mRNA表达变化不明显。 4．流式细胞仪测定：假手术组脑细胞凋亡率和空白组没有明显区别；单纯脑缺血 再灌注3h后细胞凋亡率显著增高并持续增高，至脑缺血再灌注24h脑细胞凋亡率达 示降低趋势，随再灌注时间延长，差别明显。 5．氧化应激功能检测：大鼠急性脑缺血再灌注后能显著的降低谷胱甘肽过氧化物 酶的活力，从而降低其总抗氧化能力，造成氧自由基损害明显，脂质氧化加剧，产生 能力(与单纯缺血组比较P0．01)。 结论 本研究利用多种技术手段，从不同角度探讨apelin对神经细胞的再生、凋亡、及 的表达而抑制脑缺血后神经细胞内质网介导的细胞凋亡。②首次证实apelin能促进脑 缺血再灌注后神经细胞的增殖，阻断细胞凋亡进程，起到神经保护作用。③Apelin超 早期干预后能够提高神经细胞内总谷胱甘肽过氧化物酶的活性，降低脂质氧化作用从 而有效的提高组织的总抗氧化能力以对抗急性脑缺血再灌注后神经细胞的氧化应激 作用。 本课题研究显示apelin．APJ系统在急性