帕克素对辣椒疫菌和枯草芽孢杆菌作用机理的研究.pdfVIP

摘要 帕克素是由嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdusnematophila)产生的广谱抗生素，其结构为含有 氨基酸与羧酸杂合体的苯并吡喃酮衍生物，对大多数G+菌和少数G-菌及多种真菌具有较好抑制 作用。在农业上，帕克素对疫霉属真菌有强烈的抑制作用，能有效控制辣椒疫霉、马铃薯疫霉等 真菌病害，具有良好的应用前景。因此，有必要对帕克素的作用机理进行研究；该机理的研究将 不仅为帕克素在农业病害防治中的应用提供理论指导，而且也有助于了解帕克素结构与功能的关 系，并为此类衍生物的设计、合成及结构改造提供理论依据。本文以辣椒疫霉菌为研究对象，同 时借助抗生素研究的模式菌枯草芽孢杆菌，从细胞、亚细胞、分子水平上对帕克素作用机理进行 了研究，实验结果如下： 1．结合辣椒疫病发生的特点，从植物病理学和微生物学的角度研究了帕克素治疗辣椒疫病的作 用机理，发现帕克素不仅能够显著地抑制辣椒疫霉菌菌丝的生长，并且对辣椒疫霉菌孢子囊的产 生、游动孢子的释放、游动孢子的游动性、休眠孢子的萌发及致病性均有不同程度的抑制作用， 能有效地治疗疫病。 2．在帕克素的作用下，辣椒疫霉菌菌丝生长缓慢，菌落稀疏，生长明显受到抑制，光学显微镜 观察发现帕克素处理后的辣椒疫霉菌菌丝普遍缢缩、菌丝分支间距加大、质壁分离明显、原生质 体凝集。透射电镜下亦见明显的质壁分离现象、细胞内成份固缩成团块状、细胞壁的电子密度降 低。 3．帕克素处理辣椒疫霉菌菌丝后，细胞膜的通透性没有改变，说明帕克素的靶标不是细胞膜。 帕克素对辣椒疫霉菌菌丝的呼吸作用有一定影响，但作用较弱。 4．由于辣椒疫霉菌的基因组未知，而抗生素作用机理研究的模式菌一般为枯草芽孢杆菌， 因此，本文采用基因芯片技术研究了帕克素对枯草芽孢杆菌168基因表达谱的影响。芯片 杂交得到的数据分析得到上调2倍以上的基因480个，下调2倍以上的基因479个。以这859 个基因作为研究对象，分析帕克素对枯草芽孢杆菌168的作用方式；该859个基因与Hutter 等研究的37个抗生素的相应基因的表达数据的聚类分析结果表明，帕克素与蛋白合成抑制 剂基因表达情况相似。进一步对这些基因的功能进行分析，发现帕克素导致下调的基因主 要涉及氨基酸合成、物质转运及氨酰tRNA合成酶以及类型I热激蛋白，上调的基因主要涉 及趋化反应及嘌呤核苷酸。根据芯片数据我们推测，帕克素作为竞争性抑制剂抑制精氨酰 tRNA合成酶的活性，进而影响蛋白质的合成。选取了6个代表不同生物过程的基因，用 Real．time RT-PCR结果与基 RT．PCR技术验证其在枯草芽孢杆菌中的表达量，结果表明Real-time 因芯片分析结果一致。 综上所述，帕克素能引起辣椒疫霉菌质壁分离、细胞质凝聚及菌丝分支距离增加等形态变化， 影响辣椒疫霉菌孢子囊的产生、游动孢子的释放、游动孢子的游动性、休眠孢子的萌发及致病性， 对辣椒疫霉菌菌丝的呼吸作用有一定的影响；从帕克素对枯草芽孢杆菌基因表达的分析，推测帕 克素是一种蛋白质合成抑制剂，其靶标为精氨酰一tRNA合成酶。 关键词：帕克素，作用机理，辣椒疫霉菌，枯草芽孢杆菌，基因芯片 Abstract Xenocoumacin derivativewithaminoacidand acid benzopyranone carboxylichybrid l(xcnO，a from ofXenorhabdus the antimicrobialisolatedcultures nematophila． moieties，ismajor compound most Xcnlhas antiulceractivitiesandinhibitsgram-positivebacteria,partlygram—negative potent some could inhibit