小麦“5389悬浮细胞系的建立和植株再生.pdf

取得的研 含其他人 机构的学 均已在论 日 定，有权 (借)阅。 检索，可 签字Et期： 年 月 日 签字171期： 年 月 日 摘要 本试验以小麦高感叶锈品种“5389”的幼胚和成熟胚为试材，进行愈伤组织的诱 导，获得幼胚的胚性愈伤组织，建立了悬浮细胞培养体系以及悬浮细胞系的植株再生。 为在单细胞水平探讨小麦抗叶锈生理机制，以及利用基因工程手段改善小麦抗叶锈性 状提供良好的试验体系。 主要结果如下： 1、研究了不同植物生长调节剂对愈伤组织诱导效应的影响，发现小麦“5389”的 状态最佳。 ． 2、研究了不同植物生长调节剂在继代过程中对愈伤组织质量改善的影响，在继 代培养时根据愈伤组织的状态调整2，舢D和KT的浓度，对于生长旺盛的愈伤组织可 以适当降低2，禾D的浓度，提高KT的浓度；对于出现褐化和生长较慢的愈伤组织， 可降低KT浓度提高2，牛D的浓度。经过三到五代的调整状态，在MS+2,4．D1．00mg／L +KT0．10 mg／L的培养基上获得了来自幼胚的呈淡黄松脆的胚性愈伤组织。 3、研究了不同植物生长调节剂对悬浮培养细胞生长的影响，确定了适于悬浮培 养细胞生长的植物生长调节剂的水平，在悬浮系的长期继代培养过程中，培养基中植 物生长调节剂的用量并不是一成不变的，应根据悬浮培养物的生长状态适当调节其用 量。研究发现水解酪蛋白、谷氨酰胺、天冬酰胺、麦芽提取物对愈伤组织和悬浮细胞 生长量的影响不明显，但它们对细胞状态的改善有一定的积极作用。 4、通过优化悬浮系的继代条件得到了小麦“5389”幼胚稳定的悬浮细胞培养体系。 并对悬浮系的生长曲线和细胞活性进行了测定，由此进一步确定了悬浮培养体系应在 7d左右继代一次，这对维持悬浮系的稳定和保持悬浮培养细胞的活力较为有利。 NAA和2．00BA 5、在悬浮培养3个月后，将悬浮细胞转入添加O．05mg／L mg／L 的MS固体培养基上培养3～5代后，获得绿色芽点，继续继代一个月，绿色芽点长成 小苗，再生植株成功。 总之，通过优化培养条件，获得了小麦“5389”幼胚的稳定悬浮细胞培养体系。这 将为本课题组进一步在单细胞水平探讨激发子诱导寄主产生防卫反应的生理机制提 供便利的实验体系。 关键词：小麦；成熟胚；幼胚；胚性愈伤；悬浮培养 Estabfishmentofcell culturesand suspension of fromwheat‘‘5389 regenerationplant