奶牛乳房炎主要病菌的相关研究.pdf

摘 要 奶牛乳房炎是一种奶牛的多发病和常见病，是由多种致病微生物引起的局部病变， 在奶牛养殖业中造成了巨大损失。因此加强对奶牛乳房炎的预防、诊断和治疗显得尤为 重要。无乳链球菌s功基因是该菌重要的吸附和定植因子，其核酸序列具有高度的保守性， 且广泛存在于无乳链球菌的各个血清型中，具有很强的免疫原性，是B群链球菌重要的 候选抗原疫苗。停乳链球菌括p基因编码菌体表面分泌蛋白，具有高度的基因保守性和很 强的免疫原性，是停乳链球菌重要的候选抗原疫苗。因此我们根据GenBank报道的无乳 链球菌B群链球菌表面免疫蛋白基I习(Surfaceimmunogenicprotein芦ip)和停乳链球菌免疫 secreted 分泌蛋白基因(Immunogenic 得虱Jsip和却基因。sip片段大小为1 提交序列进行同源性比对，同源性分别为99．46％和98．57％。将sip基因与卸基因分别与 重组菌株经IPTG诱导后进行蛋白表达，SDS—PAGE与Westemblot检测显示表达的蛋白 浓度为0．6mmol／L和1mmol／L时，蛋白表达量最高且得到的融合蛋白具有良好的抗原性， 这为进一步研制基因工程业单位疫苗奠定了基础。 通过大量查阅文献，基本确定奶牛乳房炎主要致病菌：无乳链球菌、停乳链球菌、 金黄色葡萄球菌、沙门氏菌中的保守基因，通过Genbank下载大量目的基因片段，建立 基因数据库。通过序列比对和同源性比对，筛选出上述致病菌的条码基因，利用焦磷酸 测序技术对致病菌的条码基因准确测序，使用特异性引物对大量菌株进行PCR验证和焦 磷酸测序验证，最终确定条码基因达到对奶牛乳房炎主要致病菌进行快速鉴定的目的， 本研究使用特异性引物对无乳链球菌108株、停乳链球菌100株、203株金黄色葡萄球菌， 51329、 136株沙门氏菌以及乳房链球菌、嗜热链球菌、表皮葡萄球菌、阪崎肠杆菌ATCC 型、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、蜡样芽孢杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、副溶血性弧菌、 阴沟肠杆菌、痢疾志贺菌等参照菌各1株进行了检验性扩增，结果显示四对引物有较强 的特异性仅出现两例假阳性，且条带大小与目的条带差距不大，未出现假阴性结果。应 lll 用PcR一焦磷酸测序方法对18份疑似奶牛乳房炎奶样进行检测，准确率为100％，而使用 普通微生物学检验方法的准确率为83％。 关键词：奶牛乳房炎，停乳链球菌，无乳链球菌，焦磷酸测序 Abstract isa andcommonseendiseasefor TheBovineMastitis COWS， frequentlyoccurring dairy oflocalaffectioncausedseveralof it’S whichisakind by pathogenicmicroorganisms．And forthe inthe to responsiblehugedamagedairyindustry．Therefore，itsparticularlyimportant enhancethe andtreatmentaimedat of prevention，diagnosis dairyCOWS．sipgene isan andcolonizationfactorforthe ads