抗瓜氨酸化变性gG抗体与CCP抗原特异性T细胞作为RA诊断靶标的研究.pdf

摘要 摘要 研究背景 类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一典型由抗原驱动及T细胞介导 的自身免疫疾病(趾D)，其特征为外周血中可检测出大量针对自身靶抗原的抗 体以及抗原特异的T、B淋巴细胞。RA病因较复杂，发病机制不明确，病变主 要涉及外周的小关节，最终会导致性关节破坏、畸形，甚至功能丧失，因此早期 诊断并控制病情的发展尤为重要。目前RA的诊断标准主要依靠临床症状、血清 学指标及影像学检查，实验室诊断过去多参考类风湿因子(I冲)的检测，但特 测抗CCP抗体的ELISA法用于RA诊断，显示了很强的疾病特异性。因而蛋白质 的瓜氨酸化在RA发病中的意义越来越引起重视。 RA的发病还涉及到一组重要的免疫分子一主要组织相容性复合体(MHC)， 人类为白细胞抗原(脚．一A)。遗传学研究表明，RA的易感基因为HLA．DR4(其 度和预后的重要指标。据此认为RA发病的启动环节首先是致病抗原被抗原提呈 细胞的HLA／DR分子提呈至细胞表面，以结合T细胞受体(TCR)形成抗原肽一 激活下游细胞因子介导的炎症反应和特定自身抗体的产生，r这一过程被认为是 RA疾病发生、发展的中心环节。 目的 健康人群中的阳性检出水平，对其在RA临床诊断与应用中的价值进行评估。 方法 将纯化兔IgG置于62C恒温水浴箱中进行热聚合变性，用肽基精氨酸脱亚 其与抗CCP抗体的结合活性，将其作为包被抗原建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的 间接ELISA法，进行方法学考核和临床病例标本检测，同时与RF检测(用未瓜 氨酸化的AgRIgG作为包被抗原)和常规抗CCP抗体检测结果进行比对。 摘要 RA的诊断性能。 结果 后，除保留与RF的结合特性，还增加与抗CCP抗体的结合活性。以瓜氨酸化 性和稳定性，重复性实验结果显示，其批内和批间平均变异系数分别为4．5％和 0．758。ROC曲线分析结果显示该抗体对RA的诊断性能为中等偏上水平(AUC～ 时阳性者134例，同时阴性者160例，总符合率97．7％，两者呈高度正相关(，． 与抗CCP抗体同时阳性者125例，同时阴性者151例，总符合率为91．7％，结 优化并确定了CCP．AST测定的流式细胞术最佳实验方案及反应条件，以 TT 摘要 血沉及ASO水平未发现有统计学差异(尸O．05)。 结论 成功建立了抗Cit．AgRIgG抗体ELISA测定方法，方法特异、敏感、可靠， 为RA诊断的一种新参考指标。采用PerCP．Cy5．5标记链酶亲合素结合生物素化 Cit．AgRIgG抗体可有效提高RA的诊断水平。 关键词：IgG；聚合变性；瓜氨酸化；类风湿关节炎；抗原特异性T细胞 III Abstract Abstract Background arthritis(RA)isa and autoimmune Rheumatoid typicalcllronic，progressive Tcells．Itscharacteristicisthat diseases，whichisdriven andmediated byantigens by lotsofautoantibodies and of T、B varietyantigen—specific againstautoantigens a and