幽门螺杆菌UrB抗原与CTB在蚕蛹中的融合表达及免疫原性研究.pdf

中文摘要 中文摘要 幽门螺杆菌是慢性活动性胃炎、十二指肠溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴 瘤和胃癌的主要致病因素，目前的治疗手段主要是应用抗生素治疗的三联疗法 和四联疗法，但是随着菌体抗生素抗性的增加，治愈率明显降低，免疫治疗可 能是有效防治幽门螺杆菌感染最有前景的方法之一，幽门螺杆菌疫苗的研制已 经成为目前研究的热点。家蚕生物反应器主要是利用家蚕杆状病毒表达系统表 达外源蛋白，因其低成本、高表达量、产物天然性好而著称。本文旨在利用家 蚕生物反应器表达CTB免疫佐剂和幽门螺杆菌UreB抗原融合蛋白，并对其免 疫原性进行研究，为利用家蚕生物反应器低成本生产幽门螺杆菌口服疫苗的研 究奠定基础。 首先，对重组杆状病毒BmNPV．UreB中ureB基因进行了序列测定， SDS．PAGE和Western blotting分析显示重组病毒在家蚕BmN细胞、幼虫和蚕蛹 中能稳定表达；利用AKTA explorerl0蛋白纯化系统对家蚕幼虫血淋巴中的 UreB蛋白进行阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化，经双向电泳进一步分离后 进行了质谱鉴定。其次，采用原核表达系统表达了CTB蛋白，GMl亲和活性分 析表明表达的CTB蛋白具有较好的GMl亲和活性，可以作为口服免疫佐剂。 和ureB基因进行了融合表达，SDS．PAGE和Westernblotting分析显示重组杆状 病毒在家蚕BmN细胞和蚕蛹中成功表达；利用抗体亲和层析对蚕蛹表达的 CTB．Linker．UreB融合蛋白进行了纯化并进行了质谱鉴定。最后，用蚕蛹表达的 CTB．Linker．UreB融合蛋白灌胃ICR小鼠探讨了该融合蛋白的口服免疫原性。实 验结果显示，融合蛋白能够明显诱导小鼠产生血清IgG，表明融合蛋白具有较好 的免疫原性，可以作为生产幽门螺杆菌口服疫苗的候选抗原蛋白。 关键词：幽门螺杆菌，尿素酶B亚单位，霍乱毒索B亚单位，连接肽，家 蚕杆状病毒表达系统 Abstract ，_—，——-——_———————_——_——●—-●—●，——，_—，————_-—_-——__—_——-—_——●——_—_’——-_—-__-__-_-_-—_—●_————一—-——一———_——_—__—__—●’_--_—__—-——_———————一 Abstract Helicobacteristhemaincausativeofthediseasesofchronic pylori agent tissues and ulcer，mucosa-associatedlymphoidlymphomagastric gastritis，duodenal and arethecurrenteradication therapyregimens cancer．Tripletherapyquadruple rateof success asthe antimicrobialresistance，the treatments．but increasing recommendederadicationhasdeclined may regimens themosteffectiveeradicative the theHelicobacter be vaccine,against ther