水稻抗白叶枯病关基因的功能鉴定及入门载体的改进.pdfVIP

万方数据 本研究得到国家转基因专项(2011ZX08009-003-001)、浙江省自然科学 基金重点项目(Z14C140001)和农业部科技创新团队的资金资助 研究工作在浙江省农业科学院“浙江省植物有害生物防控重点实验室 ——省部共建国家重点实验室培育基地”完成 This work was financially supported by New Varieties of Genetically Modified Organism Cultivation of China (2011ZX08009-003-001), Special Grant from Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (Z14C140001), and the Program for Leading Team of Agricultural Research and Innovation of Ministry of Agriculture, China. This work was done in State Key Laboratory Breeding Bas e for Zhejiang Sustainable Pest and Disease Control. 万方数据 摘 要 水稻白叶枯病是一种由白叶枯病菌引起的细菌性病害，已严重影响到了水稻的品 质与产量。克隆抗病基因，培育抗病品种才是经济有效的防治水稻白叶枯病方法。 本研究克隆了22 个水稻抗白叶枯病相关基因。其中4 个基因是通过酵母双杂筛 选出的抗病相关基因，另外18 个基因是对Y73 接种白叶枯病菌后筛选出的抗病相关 基因。Xa5 是水稻感病抗病过程中的一个重要信号转导节点；xa5 是一个已知的抗病 基因，它的抗病功能是由于其编码的蛋白与Xa5 有一个氨基酸的差异；OmXa5 是疣 粒野生稻中Xa5 的等位基因，而且它编码的蛋白与Xa5 、xa5 均有差异。为了研究这 22 个基因的功能及它们与水稻抗白叶枯关键基因Xa5 、xa5 、OmXa5 之间的互作关系， 我们进行了一系列的研究。 22 个互作候选基因分别与Xa5 、xa5 、OmXa5 进行BiFC （双分子荧光互补）互作 鉴定后发现：Xa5 与过氧化氢同工酶(Os02g0115700)、类组蛋白(Os05g0461400)互作 发生在细胞核上，与类泛素蛋白(Os09g0420800)互作同时发生在细胞核和细胞质膜 上，与其余的 19 个候选基因互作时没有观察到荧光信号；OmXa5 与这22 个候选基 因的互作模式和 Xa5 相同；xa5 与过氧化氢同工酶(Os02g0115700) 、类组蛋白 (Os05g0461400)互作发生在细胞核上，与类泛素蛋白(Os09g0420800)和其余19 个候选 基因互作时没有观察到荧光信号，可见xa5 与这22 个候选基因的互作模式与Xa5 不 同。我们推测类泛素蛋白(Os09g0420800)、过氧化氢同工酶(Os02g0115700)、类组蛋 白(Os05g0461400)这三个蛋白可能是水稻抗病相关途径中的重要调控因子；OmXa5 的功能与Xa5 相似，其突变的氨基酸可能对蛋白的功能无影响。 利用亚细胞定位技术对22 个互作候选基因的表达产物进行了分析，为这些基因 的功能研究提供了重要信息。22 个候选基因中5 个基因的 sGFP 融合蛋白定位于细 胞核上，可能发挥了转录因子的功能；5 个基因的 sGFP 融合蛋白定位于细胞质膜上， 推测其功能可能是在细胞质膜上调控物质转运；6 个基因的 sGFP 融合蛋白同时定位 于细胞核和细胞质膜上；另外还有 6 个基因的 sGFP 融合产物亚细胞定位时没有观 察到荧光定位信号。 在进行互作鉴定及亚