沙棘籽渣黄酮对、脂代谢的调控及机理探讨.pdf

摘要 摘要 rhanmoides 沙棘(Hippophae 不仅具有良好的改良土壤和水土保持功能，而且有很高的药用价值。沙棘籽渣是 沙棘籽榨油后的残渣，也是沙棘初级利用后的弃物，沙棘籽渣黄酮(flavonoids fromseedresidues rhamnoides ofHippophaeL．，FSH)是其所含的生物活性成分 之一。课题组前期研究显示FSH具有干预糖、脂代谢异常的生物学活性，本文 在此基础之上，通过观察FSH对脂肪细胞糖代谢及分化的影响，结合高脂饮食 小鼠模型，进一步探讨了FSH调节糖、脂代谢的作用机理及靶点。 研究首先分离大鼠脂肪细胞，通过检测细胞葡萄糖消耗量，对实验室几种植 物有效成分进行了筛选，结果显示FSH促进大鼠脂肪细胞消耗葡萄糖的作用最 与胰岛素联合作用时，细胞葡萄糖消耗量显著高于胰岛素单独作用。 根据上述结果，实验进一步观察了FSH对3T3-L1脂肪细胞糖代谢的影响。 结果显示，10-1000 I_tgtmL的FSH对前脂肪细胞消耗葡萄糖的能力无明显影响， 但200～800 I．tgtmL的FSH能显著促进经诱导分化成熟的脂肪细胞消耗葡萄糖。 同时FSH在200 mRNA的表达，提示FSH可 I-tgtmL浓度下可有效提高GLUT4 能通过上调GLUT4mRNA的表达来促进脂肪细胞消耗葡萄糖。 另外，通过油红O染色和甘油三酯含量测定观察FSH干预脂肪细胞分化的 程度。结果显示，50和100 gg／mL的FSH能够显著降低油红O洗脱液吸光度值， 25、50和100 I_tg／mL的FSH可使脂肪细胞内甘油三酯含量显著降低，说明FSH 能够抑制3T3-L1脂肪细胞的分化。同时，MTT实验结果显示，5-100 I_tg／mL的 FSH可对3T3．L1前脂肪细胞的增殖产生抑制作用。 以上细胞试验结果表明，FSH具有促进脂肪细胞消耗葡萄糖，抑制脂肪细胞 分化及前脂肪细胞增殖的作用，提示脂肪细胞可能是FSH发挥作用的潜在靶细 胞，FSH在体内的降糖调脂活性可能是通过对脂肪细胞功能的调节而实现的。为 进一步验证和探寻FSH发挥药效的作用途径，本研究利用高脂饮食小鼠模型观 察FSH对模型鼠糖、脂代谢的影响并探索其作用机理及靶点。结果显示：连续 灌胃FSH(50、100和150 W，与高脂对照组相比，模型小鼠体 mg／kg剂量)12 重、肝脏系数、附睾处脂肪垫系数下降，但平均饮食量和饮水量、心脏系数、脾 脏系数、肾脏系数无明显变化；血清TC、LDL．C、LDL．C／TC和血糖水平降低， 摘要 HDL．C仳升高，口服糖耐量得到改善，而胰岛素水平和胰岛素敏感指数无显著 性变化。FSH处理组小鼠肝脏TC、TG含量降低，透射电镜观察显示FSH组小 鼠肝细胞中脂滴数量减少，而骨骼肌中TC、TG含量无明显变化。此外，FSH 组小鼠肝脏LPL和HL活性及骨骼肌LPL活性均无显著性差异，而脂肪组织LPL 和T-AOC无明显变化。根据上述实验结果并结合细胞试验，推测肝脏和脂肪组 织可能是FSH发挥药效作用的主要靶组织，因此试验进一步检测了肝脏和脂肪 组织中与糖、脂代谢相关基因表达的变化。结果显示，与高脂对照组相比，FSH 组小鼠肝脏组织中LDLR和PPARamRNA表达量增加，G．6．PasemRNA表达下 降，并且低剂量的FSH(50 mRNA的表达。在脂肪组织中， mg／kg)能够增加GK 高剂量的FSH(150 降低IRS．2 mRNA表达，但能不同程度的增加IRmRNA和P13K、Akt蛋白的表 达。 综上所述，FSH能够降低高脂饮食小鼠的血脂血糖水平，肝脏和脂肪组织是 FSH调节糖、脂代谢的主要靶组织。F