氯霉素单克隆抗的制备及免疫检测方法的初步建立.pdf

摘 要 对便宜的，高度有效的广谱抑菌性抗生素。但是，氯霉素含有毒性，氯霉素药物的滥用， 会对人和动物体产生毒副作用，造成母畜的流产、早产，致使牲畜的生育能力降低、产 仔数量减少等。氯霉素还会使人体产生多种疾病，如视神经炎、灰色综合症、肝损伤、 血液疾病等，氯霉素甚至能直接导致人和动物体的死亡。 目前，氯霉素的检测主要有微生物法、酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱 物法特异性差、灵敏度低、所需时间长。液相色谱．质谱联用法和气相色谱．质谱联用法 能在抗生素低残留水平上对氯霉素进行检测，并且特异性强，但是所用仪器昂贵、样品 预缝理时间长UELjf_gA方法灵敏度高、‘特异性强、所需时间短：能够同时检澳4大量的样 。?。‘一一…一 -，…·r 品，也不需要昂贵的仪器，-适合基层实验人员进行大量样品的检测。本实验即是使用 ELISA方法对氯霉素残留物进行检测。 本实验使用重氮化法针对氯霉素所含有的硝基，选用牛血清白蛋白和卵清白蛋白 作为载体蛋白，对氯霉素小分子进行偶联。偶联完成后用SDS．PAGE电泳法、紫外分 光光谱法、红外扫描图谱方法定性和定量的证明了氯霉素全抗原合成实验的偶联成 17．1小CAP．OVA10：1。 功，偶联比率分别为：CAP．BSA 血清进行敏感性测定，选取小鼠血清效价和敏感性最好的三号小鼠进行融合实验。细胞 融合实验后，筛选出了三株效果好的杂交瘤细胞，分别为2A6、4E10、4E12。将这三株 似物进行了交叉反应实验，测得氯霉素2A6抗体与氟苯尼考、甲砜霉素、四环素、磺胺 二甲嘧啶的交叉反应率都低于O．01％，说明本实验制备的抗氯霉素单克隆抗体具有良好 T 的特异性。 本实验使用问接竞争ELISA浊对CAP残留物进行检测，所得的灵敏度达剑2．213 ppb，该方法对标准品的检测限为O．17ppb。本研究制备了抗氯霉素的单克隆抗体，初步 建立了榆测氯霉素的酶联免疫方法，并对反应条件中的抗原抗体反应时间、一抗浓度、 抗原包被条件、酶标二抗浓度和包被浓度五个条件进行了优化。本实验为进一步研究氯 霉素残留物的检测产品提供了理论基础。 关键词：氯霉素全抗原单克隆抗体ELISA II Abstract knownas Chloramphenicol(CAP)，also benzene isakindof and effective alcohol，it relatively highly inexpensive antibacterial is ithasthetoxicsideeffictstothehuman and antibiotics．CAP toxic，and beings animals itcanmakethefemaleanimals the byusingit，forexamples abort，preterm，make animalslower the andSOon．CAPCanalso thehuman fertility,reducefecundity give beings as Caneven disease，such many opticneuritis，graysyndrome，liverinjury,blooddisease，CAP