枯草芽孢杆菌H11发酵生产γ-聚谷氨酸的研究.pdf

摘要 丫．聚谷氨酸(Y．PGA)主要是一些芽孢杆菌产生的一种胞外高分子多氨基酸聚合物， 是由L一谷氨酸和D一谷氨酸通过a一氨基和Y一羧基形成的酰胺键缩合形式的一种多肽。Y ．聚谷氨酸是一种具有极强水溶性、生物相容性、可完全降解性的环境友好型新材料， 在医药、农业、食品等领域，具有极大的开发价值和应用前景。本文从?-PGA产生菌的 鉴定、诱变育种、液体发酵工艺、固体发酵条件等方面进行了研究。主要研究结果如下： 6S 1，经过进一步电镜结果及1 (1)试验室保藏Y一聚谷氨酸产生菌Bacillussp．HDl subtilisHDIl。 rRNA基因序列分析，确定为枯草芽孢杆菌，命名为Bacillus subtilisHDl (2)以Bacillusl为出发菌株，采用硫酸二乙酯、亚硝基胍对菌株进行 率达到20．27 g／L，比原保藏菌种提高了39．2％，且传代稳定。 (3)对诱变选育的菌株F12的液体发酵工艺进行了研究。试验结果表明g葡萄糖、 生产丫-PGA最适初始葡萄糖浓度为15 糖，使总葡萄糖浓度为60g／L，1,-PGA产率达到26．32g／L,最适初始谷氨酸钠浓度为 30 g／L，在发酵24h时补加谷氨酸钠，使总谷氨酸钠浓度为40 糖，24h时一次补加谷氨酸钠发酵效果最好，?-PGA产率达到30．57g／L。甘油对菌株F12 g／L的甘油，),-PGA产 发酵生产1,-PGA有明显的影响，试验表明在发酵16h时添加30 率提高到31．02 g／L。在同时补加葡萄糖、谷氨酸钠发酵过程中，在发酵16h时添加30g／L g／L。 甘油，?-PGA产率达到了34．25 (4)将三羧酸循环中间体(苹果酸、延胡索酸)，氨基酸(L．谷氨酸、L．苯丙氨酸、 L．谷氨酰胺、L．天冬氨酸、L．缬氨酸)及草酸添加到发酵培养基中初步了解对丫．聚谷氨 酸合成的影响。通过多质量浓度梯度试验发现，L．谷氨酸、L．谷氨酰胺、L．缬氨酸最适 添加浓度分别为：4g／L、3g／L、3g／L：／-PGA最高产率分别达N-43．68g／L、43．88g／L、 34．68 g／L。 (5)以F12为试验菌株，对其固态发酵生产Y一聚谷氨酸的条件进行了初步研究。 其中包括对培养基基质、载体、料水比、接种量、发酵时间、外加碳源、外加氮源的研 究。结果表明基质选择大豆粉、载体为麦麸发酵效果最佳。最佳培养条件为：料水比为 1：l，接种量8％，发酵时间36h。添加葡萄糖20 g／kg，尿素20 g／kg，谷氨酸钠20 g／kg，对 01 g／kg，1 Y-PGA合成均具有显著的促进作用，丫-PGA产率分别达N90g／kg，98g／kg。 关键词：丫一聚谷氨酸，诱变，工艺优化，固体发酵 ¨ ABSTRACT extracellularmacromolecular some 丫-Polyglutamicacid(7-PGA)，an peptidemainlyproducedby bacteriain consistsofD-and acids isa