新型免疫刺激分增强DNA疫苗免疫原性的研究.pdf

1 111111111 II I III IIIIIIIill 1 Y194261 摘要 摘要 Hsp65作为DNA疫苗的模式抗原是机体对抗结核分枝杆菌入侵的重要免疫 保护性及治疗抗原。然而，增强DNA疫苗免疫效果则是令人期待的。因此我们 shock 构建麻风分枝杆菌热休克蛋白65(Heat protein65，Hsp65)的原核表达载体， 诱导表达、纯化该重组蛋白并制备Anti．Hsp65小鼠多克隆抗体；并探讨在麻风 分枝杆菌热休克蛋白Hsp65终止密码与真核表达载体polyA之间插入CpG基序 以提高DNA疫苗在小鼠中诱导的细胞免疫和体液免疫；同时探讨以内含子A增 强Hsp65在真核细胞中的表达效率及提高DNA疫苗在小鼠中诱导的免疫原性。 通过ELISA、ELISPOT和胞内细胞因子染色技术等实验方法进行分析，结果小 结如下： 融合蛋白相对分子质量约65 2、含有CpG02的重组质粒瞬时转染小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞，其 IFN．0【， 特异性总IgG和IgG2a抗体水平也更高，分泌IFN_Y的T淋巴细胞频率也增加； pVAXlhsp65在人胚。肾上皮细胞系293T细胞中的抗原表达量更高，免疫小鼠后 CD4+和CD8+T淋巴细胞频率增加。 经过上述验证，我们成功表达与纯化了麻风分枝杆菌Hsp65的重组蛋白， 并制备了效价及特异性良好的Anti．Hsp65小鼠多克隆抗体；在抗原转录区下游 插入CpG免疫刺激基序能更好地提高DNA疫苗在小鼠中诱导的免疫原性；内 含子A可增强Hsp65在真核细胞中的表达效率并可提高DNA疫苗在小鼠中诱 导的免疫原性。 关键词 热休克蛋白65：CpG基序；DNA疫苗；免疫原性；内含子A ABSTRACT ABSTRACT isknowntobea with and activities Hsp65 goodantigen protectivetherapeutic tuberculosiswhen from DNA against expressedplasmid isdesirable．Toconstructthe improvedefficacy recombinant prokaryoticexpression vector Heatshock of containing protein65(Hsp65)codinggeneMycobacterium to and thefusion and mouse leprae，andexpresspurify protein prepareAnti．Hsp65 thehumoralandcellular polyclonalantibod