海洋专性解烃菌ycloclasticus spp.的代谢特性及协同降解高分子量多环芳烃的研究.pdf

谨以此论文献给我的导师杨官品教授和关心、支持我 的家人、同事和朋友。 崔志松 万方数据 万方数据 万方数据 海洋专性解烃菌 Cycloclasticus spp. 的代谢特性及协同降解高分子量多环芳烃的研究 海洋专性解烃菌 Cycloclasticus spp.的代谢特性及协同降 解高分子量多环芳烃的研究 摘 要 解环菌属细菌是近十年来在世界范围不同海域陆续发现的一类能够以多环 芳烃（polycyclic aromatic hydrocarbons，简称 PAHs）为唯一碳源和能源生 长的海洋“专性解烃菌”（the obligate hydrocarbonoclastic bacteria，简称 OHCBs）。它们在海洋溢油的自然生物降解过程中发挥着极其重要的作用。然而， 解环菌属细菌的生长特性非常独特，其分离培养也非常困难，因此有关其纯培养 菌株生长及降解特性的研究也较少。本文重点研究了从黄海沉积物中分离到的3 株解环菌属细菌 Cycloclasticus sp. NY93E, Cycloclasticus sp. PY97M 和 Cycloclasticus sp. PY97N 的 PAHs 代谢 特性以及在高分子量多环芳烃 （high-molecular weight polycyclic aromatic hydrocarbons，简称HMW PAHs） 降解过程中解环菌属细菌和其它菌株之间的相互作用。首先，通过对多个站位的 海洋沉积物样品进行选择性碳源富集以及可培养细菌分离，从海洋环境中共获得 了 120 余株可培养细菌。根据其 16S rRNA 基因序列完成了上述菌株的初步系统 发育学分析，发现这些菌株基本上属于α-变形菌纲和γ-变形菌纲。其中包括了 约 25 株海洋专性解烃菌，它们分别隶属于解环菌属、食烷菌属和海杆菌属等。 其次，从细胞形态观察、系统发育学分析、PAHs 代谢特性研究、PAHs 双加氧酶 基因同源性分析等多个方面对3株解环菌属细菌进行了较全面的研究比较，丰富 了对解环菌属细菌特性的认识。分离自黄海沉积物的3株解环菌属细菌区别于该 属其它菌株的主要特点是对HMW PAHs的降解能力，它们均能够以4环PAHs芘和 荧蒽作为唯一碳源和能源生长，并且具有更强的PAHs代谢活性。它们对0.02 g L-1 芘、荧蒽 21d后的降解率分别为51.65%～63.43%和49.32%～65.21%。采用简 并引物从 3 株解环菌属细菌的基因组 DNA 中分别克隆到编码其 PAHs 双加氧酶的 大小亚基基因 phnA1A2 （约 1.9 kb）。该基因片段与Cycloclasticus sp. A5 中 相应基因的整体相似度为98%，而与 Cycloclasticus sp. P1中相应基因的整体 相似度为99%。最后，通过石油烃降解能力测定、培养物表面张力测定等，获得 了多个种属、具有不同石油烃及 PAHs 降解能力的降解菌以及生物表面活性剂产 I 万方数据 海洋专性解烃菌 Cycloclasticus spp. 的代谢特性及协同降解高分子量多环芳烃的研究 生菌约 46 株，这些菌株可用于与解环菌属细菌构建共培养体系以提高其对 HMW PAHs 的降解率。与此同时，还对这些 PAHs 降解菌中的 3 个海杆菌属新种