水稻变异株系中米DNA侧翼序列的研究.pdfVIP

l Y1 摘要 本研究是利用本实验室创建的远缘分子杂交技术将玉米DNA直接导入水稻细胞，于 2000年获得了具有玉米气生根性状的水稻变异株系，选取稳定遗传八代的水稻变异株系 从变异株系中筛选出1条与阳性对照玉米相同的DNA条带，对该条带进行回收、克隆和 测序得到一条长为349bp的序列，NCBI上对测序结果进行Blastn相似性搜索，发现该 NM 序列与玉米序列(refI Nested引物P5M3Sense和Anti Sense—P5M3对阳性对照和变异株系验证，对目的带进 率为99．53％，仅有一个碱基差别，经Blast检索进一步确定该序列为玉米序列。 运用TAIL—PCR技术对已知目的序列的未知侧翼序列进行延伸，根据上述已知目的 对的组合及反应体系，其中兼并引物Tail-AD3与特异引物的组合所得到理想的实验结 位于玉米mRNA 序列，初步推断该变异材料与玉米DNA的插入或重组存在一定的联系，近一步证明水稻 远缘分子杂交技术可以使玉米DNA片段进入水稻细胞导致水稻发生变异。 关键词：远缘分子杂交技术，玉米DNA，水稻，侧翼序列，AFLP，TAIL—PCR ABSTRACT rice has of Theaerialrootsofmaizemutantlinesof traitswhicheightgenerationsgenetic in this wasobtainedfrom2000viadistantmolecule createdour stability hybridization laboratory．Inthesis， whichinherited maizecharacteristicsincludedaerial thevariatiedmaterials steadily谢m root，were selectedfor and werenumbered 14)、andCK2 studythey and were themolecularmaker ofAFLPfor (Xiangdao1)respectlythey analyzedthrough technology Wasexaminedbetweenvariantlineand the Wasoneband positivecontrol，called polymorphism，there bandwhichWasclonedand andthe ofthe bandis TheBlastsearchs target sequencedlength target 349bp theresult，the sequencewithl00％similarityofthemaize P5M3SenseandAntiSense-P5M3wereselceted tomaize for between according sequencedetecting controlandVariantsLinesof 21 band via extractionand positive validation，a2bp getedgel andvariationofthesame