核黄素生物合成制剂产生菌的筛选及研究.pdfVIP

浙江工业大学201 1硕士研究生论文 核黄素生物合成抑制剂产生菌的筛选及研究 摘要 肠道细菌能少量合成外需从食物中获取，而许多微生物如革兰氏阴性 致病细菌、病原酵母由于缺乏有效摄取体系，依赖自身内源合成。因 此核黄素的生物合成可作为抑菌物质筛选新靶标。本研究旨在从土壤 中活体筛选出能抑制核黄素生物合成的菌株，体外验证其抑制性能并 进行菌种鉴定，确定活性物质合成的最优培养基和最优发酵条件，研 究结果如下： 为指示菌，琼脂移块法初筛，管碟法和摇瓶发酵法复筛，获得一株能 抑制假丝酵母核黄素合成的菌株Q210，对单位菌体量酵母的核黄素 合成抑制率达57．63％。 1o抑制 (2)构建假丝酵母核黄素体外酶合成反应体系，对菌株Q2 1o活性产物对核黄素合 核黄素合成进行体外验证，结果显示菌株Q2 成抑制率达93．62％。对该体系反应条件进行优化：酵母粗酶液最适 反应温度为29℃，最适反应时间为30min，置一30℃冰箱可储存45d， 酶活力保持在91．75％以上。 rDNA序列 (3)对菌株Q210进行形态、生理生化研究，结合16S subtilis。 分析，确定该菌为Bacillus 浙江工业大学201l硕士研究生论文 (4)对菌株Q210活性产物的理化性质进行研究。研究表明，该活 2～12范围内能较稳定 性物质为胞内水溶性产物，在20℃～90℃及pH 存在，置4℃冰箱可保存10天活性基本不变。蛋白酶K试验显示活性 物质为多肽类或蛋白类物质。 (5)对菌株Q210的基础发酵培养基和发酵条件进行研究。结果发 现：菌株Q210最佳基础发酵培养基为改良碱性PDA培养基，最佳 发酵时间为4d，发酵条件正交试验优化结果为菌龄为60h、装液量 为40 mL、发酵初始pH为8．0和接种量为2％。 关键词：核黄素，生物合成抑制剂，活体筛选，假丝酵母，菌种鉴定 SCREENINGAND STUDY0FRIBOFLAVIN BIOSYNTHESISINHIBITOR PRODUCING STRAIN AB STRACT asthe ofFMN Riboflavin(riboflavin)servesandFAD． precursor Humanandanimals mustobtainriboflavin from forsmall dietaryexcept intestinal synthesis by bacteria，while as