溴氰菊酯抗性和感品系小菜蛾幼虫体内差异表达蛋白的鉴定与分析.pdfVIP

摘要 摘要 小菜蛾Plutella L．属鳞翅目菜蛾科，作为世界性分布的十字花科蔬菜主 xylostella 要害虫，也是抗药性产生最快和最强的农业害虫之一。自1953年小菜蛾被报道成为 世界上第一个对DDT产生抗性的作物害虫以来，己对多种杀虫剂产生抗性，其中以 对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性发展最快。小菜蛾抗药性的产生和不断增强带来一系列 的危害，农业减产、环境污染、伤害天敌、甚至危害人类的健康和生态平衡。因此， 小菜蛾抗性机理方面的研究刻不容缓。 品种之一，对哺乳动物安全，具有广谱、低残留的特点，在生产实践中得到了广泛应 用。我们前期的研究发现，小菜蛾溴氰菊酯敏感品系和抗性品系成虫期的蛋白质双向 电泳图谱存在显著差异。但是，小菜蛾的主要危害是在幼虫期，而且同一蛋白在不同 生理阶段表达水平也有很大差异，因此分析幼虫在溴氰菊酯胁迫下蛋白质表达谱的变 化，不仅有助于阐述抗性机理，分析交互抗性，还有望筛选出杀虫剂的分子靶标。本 文在前期工作的基础上，采用双向电泳和质谱技术对小菜蛾幼虫体内差异表达的蛋白 质进行分离和鉴定，通过基因转染技术进一步验证基因与溴氰菊酯抗性之间的关系。 主要结果如下： (1)构建了高分辨率和重复性较好的溴氰菊酯抗性和敏感品系小菜蛾幼虫的蛋 白质双向电泳图谱。运用imagemaster2Dplatinum软件分析凝胶图谱，分离出的蛋白 质斑点约900个，其中有89个蛋白点的表达丰度存在两倍以上差异。 (2)随机选择30个差异明显的蛋白点进行串联质谱分析，Mascot软件检索这 些在抗性品系中表达而在敏感品系中不表达或者不同品系中差异表达的蛋白质的归 属、性质和功能，最终成功鉴定出lO个蛋白，这些蛋白涉及能量代谢、糖酵解、氨 基酸代谢、脂质代谢、蛋白质折叠与降解、转录调控以及致死因子诸多方面。 (3)选取3个蛋白进行荧光定量PCR验证，发现这些蛋白质在mRNA水平的 表达与在蛋白水平的表达是一致的。 基因转染技术将重组质粒导入果蝇Kc细胞，细胞毒力实验结果表明，过表达TCTP 基因的实验组细胞活力高于对照组。 本研究发现了溴氰菊酯胁迫下小菜蛾幼虫体内差异表达的蛋白，这些差异表达的 蛋白为进一步研究溴氰菊酯的作用靶标和作用机理，筛选与其抗性相关的蛋白质提供 理论依据。 关键词：小菜蛾；溴氰菊酯；蛋白质组；双向电泳；质谱 Abst憎ct Identificationand of analysis differentiallyexpressedproteins betweenthedeltamethrin．．resistantandsensitivestrainsof Plutella larvae xylostella ABSTRACT Thediamondback oneofthemostdestructivein moth，PluttelaL．，is xylostella pests cruciferous overthe havethefastestandmost world，and vegetables(CFV)all powerful resistance．In1 diamondbackmothbecamethefirst intheworldto 953，the croppest to resistance now