灰葡萄孢菌激活白的纯化与功能研究.pdfVIP

灰葡萄孢菌激活蛋白的纯化与功能研究 摘要 激活蛋白是一类激活植物免疫系统、提高植物诱导抗性和促进植物生长的一类耐温蛋白质。本 cinerea)中分离纯化出一种能引起烟草过敏性反应的激活蛋白、该蛋白 文从番茄灰葡萄孢(Botrytis 能诱导烟草和番茄抗病性、并能显著促进玉米植株生长；提高抗病相关酶活性活力。同时，为了蛋 白生物农药的使用和生产、研究了灰葡萄孢菌高产蛋白的发酵培养基和发酵条件、测定了灰葡萄孢 菌激活蛋白的生物活性。主要研究结果如下： (1)通过菌丝超声破碎、高温处理(100℃30m／n)、AKTA蛋白纯化仪和变性电泳割胶纯化 等方法、从灰葡萄孢菌(Botrytis 检测为单一条带和单一斑点、相对分子量为15胁。 (2)该激活蛋白是一种可以诱导烟草产生过敏性反应的蛋白激发子、通过提高番茄抗性相关酶 活性来诱导番茄对灰霉病的抗性、蛋白处理浓度为10 pg／mL诱导能力最强、并且持效期最长。激活 蛋白处理浓度为10 I,tg／mL时也可以促进小麦苗的生长和根长。 (3)经MALDI ToF／ToF检测得到激活蛋白的氨基酸序列、该蛋白含有136个氨基酸、理论分 子量为15．367 Blast比对、与灰葡萄孢菌菌株 KD、其pJ值为11．15。在NCBI数据库中protein Botryotiniafukeliana(strainBcDWl)或者Botryotiniafukeliana(strainT4)的一种假想蛋白一致。 (4)进行了碳源氮源正交试验设计、筛选了碳源、氮源和碳氮比、优化了培养温度、培养液初 始pH值、转速和装液量等培养条件。获得最适培养成分为：蔗糖3％、酵母浸粉1％、0．1％硝酸钾、 mL 5．0．6．0之间、培养温度22℃、500 0．1％磷酸二氢钾、0．05％磷酸镁。最佳培养条件为：初始pH 的三角瓶装液量为150mL、摇床转速160r／min。 (5)测定了灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)激活蛋白的生物活性。发酵破碎液可以提高烟草对 TMv的抗性和促进玉米苗生长、稀释100倍时抗病效果(枯斑抑制率)超过4596、稀释1000倍对玉 米苗的促进生长效果最好。 关键词： 灰葡萄孢菌；激活蛋白；过敏反应；抗病性 万方数据 Purificationand ofActivatorProtein ActivityAssay from cinerea Botrytis Abstract Activator an roleintheinductionof proteins(elicitors)．atemperatureprotein．playimportant plant defense andenhancediseaseresistance this activator responses plant againsepathogences．Inpaper,all fromthe of cinerea isolatedand tomatoesBotrytis protein mycelium