甜高梁再生体系优化研究.pdfVIP

甜高梁再生体系的优1弋研究 甜高梁再生体系的优化研究 摘要 甜高粱的光合效率是小麦等作物的2～3倍，是目前公认的最具优势的生物质 能源作物，可糖、粮兼用，其综合价值高。然而截止目前，甜高粱缺少综合性状 优良的品种。利用转基因技术，对现有的甜高粱品种进行定向改良，有望获得高 生物量和高抗逆性的新品种。甜高粱再生体系的稳定、高效性在其遗传转化时起 到关键作用。 本研究以引种至广西南宁种植的北甜三号(BT3)和辽甜三号(LT3)两个甜高 粱品种的成熟种子为试验材料，主要优化这两个品种的再生体系，以期获得方便、 高效、稳定的甜高粱再生体系，为下一步遗传转化体系的建立奠定良好的基础。 目前取得的主要研究结果如下： l优化愈伤组织的诱导 首先通过不同植物激素2，4．二氯苯氧乙酸(2，4．D)、1．萘乙酸(NAA)、6．苄 基腺嘌呤(6．BA)、激动素(KT)浓度配比的优化试验，得出最优激素组合： NAA。在上 BT3为2．Omg／L2，4．D+0．1mg／LNAA，U’3为2．Om∥L2，4一D+O．2mg／L 一步的基础上，再通过不同基本培养基(MS、1／2MS、B5、N6)、不同糖源(蔗 糖、葡萄糖、葡萄糖：果糖=3：2)、不同pH值(5．3、5．8、6．3)的优化试验，另 对愈伤组织诱导的影响试验，最终筛选出两品种的最佳愈伤组织诱导配方：BT3 NAA， 为MS+2．Omg／L2，4-D+O．1m∥LNAA，LT3为MS+2．0mg／L2，4一D+O．2mg／L pH值5．8、蔗糖为糖源时，胚性出愈率最高，愈伤组织诱导培养基中添加AgN03 不能促进两基因型甜高粱种子愈伤组织的形成，相反却降低了其胚性愈伤组织的 诱导。另外，通过愈伤组织的不断继代培养观察，摸索出最适的愈伤组织增殖配 方：MS+2．Omg／L2，4一D+0．5～1．0mg／LNAA，两品种的愈伤组织在此配方上不仅 褐化率低，而且增殖快。 2潮霉素对甜高粱愈伤组织生长的影响 通过在愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度(四个浓度梯度：25、50、75和 甜高梁再生体系的优化研究 的胚性愈伤组织全部死亡并变为黑褐色。采用这两个浓度潮霉素筛选甜高粱的抗 性愈伤组织，将可能会影响转化细胞的正常生长。潮霉素水平为25mg／L时不可 以完全地抑制甜高粱胚性愈伤的生长，若用其筛选转化成功的愈伤组织，将不能 使许多非转化的愈伤组织死亡。然而当潮霉素的浓度水平为50m∥L时，甜高粱 的胚性愈伤可以完全停止生长并最终褐化死亡，但细胞不会大量地快速死亡，因 此可以作为BT3和LT3两品种转化细胞筛选的理想浓度。 另外，25和50mg／L潮霉素对两品种愈伤组织生长影响的结果为LT3愈伤组织 存活率都高于BT3，这说明潮霉素对甜高粱愈伤组织的影响存在基因型差异。 3丛生芽诱导的优化 通过不同植物激素(6．BA、NAA、2，4．D)浓度配比的优化试验，可比较得 出两甜高梁品种丛生芽诱导的最佳激素配比都为Ms+1．0mg／L6一BA+O．2m∥L NAA+0．5m∥L2，4．D，但是它们的丛生芽诱导率有一定程度的差异。另外，通过 多次试验观察对比，摸索出适宜两品种的丛生芽增殖配方：MS+1．0mg／L 6-BA。 NAA+1．0mg／L6-BA，壮苗配方：MS+O．1m∥LNAA+1．Omg／L 4甜高粱组培苗生根的优化 首先通过不同基本培养基(MS、1／2MS)对组培苗生根的影响试验，可比 较得出l／2MS添加激素更有利于生根；然后再在1／2MS上添加不同浓度的植物 激素吲哚丁酸(IBA)、NAA、生根粉，综合根的质量、生根率、生根时间、生 IBA； 根苗的长势等各种因素分析可