生物素高产菌的选与育种研究.pdfVIP

浙江工业大学2012硕士研究生论文 生物素高产菌的筛选和育种研究 摘要 生物素是一种不能由人体合成的水溶性维生素，其参与体内重要 的蛋白质和脂肪酸代谢。由于其重要的生物学作用，被广泛地应用到 多个领域。本论文对生物素高产菌株的筛选和育种进行了研究，研究 内容主要包括生长圈法筛选生物素产生菌株、生物素产生菌株的分类 鉴定、生物素产生菌株的紫外线一氯化锂复合诱变、高效液相色谱法 检测生物素产量和生物素高产基因工程菌的构建。 实验利用产氨短杆菌的营养需求，通过平板初筛和摇瓶复筛，获 得两株产生物素能力较强且稳定的菌株，其中一株菌FD的生物素产 量达到191．6 ug／L。 为了更好地了解菌株的功能和特性，对两株产量较高的菌株FD 和DJ@，通过菌株形态、生理生化特性以及菌株的16SrRNA基因序 列分析对其进行分类鉴定，将它们鉴定为假单胞菌Pseudomonas sp．。 采用紫外线一氯化锂复合诱变，通过生物素类似物的抗性筛选， 获得菌株FD的一株突变菌，生物素产量为207 ug／L。实验采用高效 液相色谱法检测发酵液中生物素的含量，其线性回归方程为 gg／mL的范围内， 其吸收峰面积v与生物素浓度X之间存在着良好的线性关系。 实验构建了一个重组表达载体pBBRlMCS一5bioB，将该表达载体 利用三亲接合转移法转化到生物素产生菌假单胞菌FD中，构建了工 程菌。通过对该工程菌进行转录水平上的检测表明，重组表达载体 pBBRlMCS一5bioB在工程菌中转录成功，最后用高效液相色谱法检测 浙江工业大学2012硕士研究生论文 高产工程菌的生物素产量。工程菌的生物素产量为929．24“g／L，比 未重组假单胞菌FD产量提高了3．85倍。 关键词：生物素；筛选；分类鉴定；育种；高效液相色谱；基因克 隆与表达 浙江工业大学2012硕士研究生论文 STUDYON STRAINSCREENINGANDBREEDINGOF mGH BIOTIN．PRODUCD汀G ABSTRACT water-solubleof an Biotin，a B—groupVitamins，playedimportant rolein and acid couldnotbe metabolism，which proteinfatty synthesized ourbodies．Becauseof its had function，biotin by significicantbiological beenusedin fieldsinthe this many pastyears．Inpaper，strainbreeding of hadbeenstudiedin the highbiotin—producing detail，including