盐胁迫下拟南芥藻糖磷酸化酶TRP的功能分析.pdfVIP

摘 要 盐是抑制植物生长发育和限制农作物产量提高的重要环境因子，植物在长期进化过 程中产生了许多适应盐胁迫的机制，主要包括提高抗氧化酶的活性、离子选择性吸收、 离子区域化及合成渗透调节物质。渗透胁迫是盐胁迫对植物造成伤害的重要原因之一。 为了避免渗透胁迫，植物细胞通过渗透调节来降低胞内水势，保持胞内水分，从而保证 植物细胞的正常生理活动。参与渗透调节的物质被称为渗透调节剂，主要包括无机离子 如：Na+ 、K+ 和有机小分子如多元醇、糖类、氨基酸等两大类。而糖类中的海藻糖是 一种重要的渗透调节物质。海藻糖最重要的生物学功能是抗逆性，通常在干旱、高盐、 高温等逆境胁迫下海藻糖作为一种相溶性介质对蛋白质、生物膜等生物大分子或细胞结 构起保护作用。但海藻糖是否在拟南芥抗盐反应中发挥重要作用目前还缺乏分子方面的 证据。 本研究对拟南芥海藻糖磷酸化酶基因AtTRP （Trehalose phosphorylase ）在植物盐胁 迫应答中的作用做了初步分析。通过PCR 和RT-PCR 分离和鉴定了该基因的T-DNA 插 入功能缺失纯合突变体，并利用该遗传材料对TRP 在盐胁迫中的作用进行分析。在NaCl 处理下，突变体trp 的萌发和幼苗的生长受到了显著抑制，因此说明TRP 基因在拟南芥 应答盐胁迫反应中发挥作用。我们构建了TRP 的GUS 表达载体并转化野生型植株，经 潮霉素筛选获得了 TRP 的GUS 转基因阳性植株。GUS 染色实验表明 TRP 主要在根、 茎、叶和花中表达。同时还构建了TRP::p-Super1300+ 的超表达载体，转基因获得了TRP 转基因拟南芥植物。带GFP 标签的TRP 瞬时表达载体的拟南芥原生质体转化实验表明 TRP 蛋白定位于拟南芥细胞质中。上述研究表明TRP 参与调节盐胁迫应答反应。 关键词：盐胁迫，海藻糖，海藻糖磷酸化酶，TRP I ABSTRACT Salt is one of the most important environmental factors that inhibits plant growth and development, and decreases crop productivity. Plants have developed a lot of mechanisms to cope with salt stress in the course of evolution, These mechanisms include increasing antioxidant enzymes activities to remove excess reactive oxygen species; selective absorption of salt ions; compartmentation of toxic ions and synthesis of compatible osmolytes. Osmotic stress is one of the most important factors that damage plants imposed by salt stress. In order to avoid osmotic stress, plant cells develop osmotic adaptation strategy to low water potentials, maintain the intracellular water content and keep the celluar physiological activities normally. Substances involved in osmoregulation are called osmolyte compounds including inorganic ions such as: Na+ and K+ and organic molecules such as: polyols, sugars, amino acids and so on. Trehalose