生物转化法应用组谷氨酸脱羧酶合成γ-氨基丁酸.pdfVIP

摘要 Y1 摘 要 acid，GABA)是一种以自由态形式存在的非蛋白 ^r．氨基丁酸“．aⅡ血obu：嘶c 质组成氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统的抑制性传递物质。GABA具有多种生 理功能，如降血压、预防癫痫、改善睡眠、抗抑郁、镇静安神、促进激素分泌和 保肝利肾等，其制备和应用广受人们的关注与重视。谷氨酸脱羧酶(g‰atc 4．1．1．1 decarboxylaSe，GAD；EC5)催化L一谷氨酸脱羧生成GABA，是生物催化 谷氨酸脱羧生成Q蝎A的限速酶。尽管大肠杆菌GAD和GABA合成已经进行 了广泛的研究，但如何获取高活性的重组GAD以及高效率、低成本、酶法生产 具有多种应用价值的GABA方法很少见报道。本研究的结果如下： l、以EcDZf 进行诱导，表达出大量分子量为53KDa左右的重组蛋白，而且重组蛋白占到全 菌蛋白的70％．75％左右，且可溶性高。 InL 2、优化了重组GAD粗酶液催化L．谷氨酸钠合成Q惦A的反应条件。l 反应体系(含3l h，GABA g／L谷氨酸钠，1．15U粗酶液，pH3．8)于37℃反应4 的生成量达到19．57 g／L，L．谷氨酸钠的转化率为93％，从而为GABA的小试生 产提供了很好的前景。 3、研究了大肠杆菌GAD的辅酶磷酸吡哆醛(PLP)及二价阳离子对其酶活的 mM 影响。研究表明：O．15 mM Ca，、 PLP能使酶活提高约一倍，在pH3．8，O．6 7．5 共效应表现为拮抗效应。Ca寸、Mn?的激活效应明显大于其它七种阳离子，激活 mL Ca?-，C棚结合蛋白，能够被PLP和Ca寸激活。1L放大反应体系中，加入30 mM O．6mM 粗GAD(12U／札)，0．15PLP， Ca2+转化150 g底物谷氨酸(底物 采取分批添加方式)，24h反应转化率达到90％以上，结晶得到的GABA产量 约94 g。 4、用海藻酸钠(25g／L)和卡拉胶(10 g／L)固定大肠杆菌谷氨酸脱羧酶 后活性仍然保持50‰进一步为工业化生产Q蟠A提供了广阔的前景。 关键词：p氨基丁酸，谷氨酸脱羧酶，大肠杆菌，生物转化法，酶法合成 Abst陷ct AbStraCt acid a血no auSa aCid，actS 7一锄：血吣butyIic (GABA)，a丘．eenon-protein m勾or intlleCentfalnen，ouS h嬲several iIl：Ilibit0巧neuI。o舰nSnlitter