精氨酸激酶在棉虫中的表达及调控研究.pdfVIP

摘 要 棉铃虫Helicoverpa kinase，AK)作为 成严重危害，还取食玉米、高粱、大豆等多种农作物。精氨酸激酶(arginine 无脊椎动物体内能晕代谢的关键酶，研究表明该酶在适应不良环境因子、免疫及防御病原侵袭等 过程中也发挥了重要作用。本文以对Bt敏感的棉铃虫品系(96S)为材料，克隆其精氨酸激酶基 对两个不同品系的棉铃虫进行了抗性相关基因及生理指标测定，分析它们之间存在的差异。本文 的主要研究结果如下： 1、利用同源序列信息比对，克隆获得96S品系的AK基因，发现基冈内部含有两个外显子和 两个内含子，构建原核表达载体并优化表达条件，得到单一可溶性的目的蛋白； 2、利用Genome 2Kb，并进行了生物学功能预测； 3、利用Real-TimePCR，对96S品系的AK基因表达量进行分析，发现它表达部位广泛，且 存在时空特异性表达，在对能量需求量大的中肠部位表达量最高。在棉铃虫幼虫期，AK基因表 达量随着龄期的增长而增加；而进入成虫期，AK基因表达量明显下降； 4、利用饲喂及注射两种方法，成功干扰96S棉铃虫AK基冈的正常表达。与正常组相比，干 扰组棉铃虫生长发育受到明显抑制，出现发育延缓现象。这一现象与生理指标测定和生态学统计 结果相符； 5、利用RT-PCR和Real．TimePCR，对Bt-R棉铃虫品系的AK基因表达量进行分析，发现它 表达量存在时空特异性表达，并随着龄期的增长而增加。与96S棉铃虫品系相比，在不同龄期和 组织中，AK表达量发生了明显的变化； 系中，血淋巴中可溶性蛋白含量明显上升，说明其体内的抗性能力得到了显著增强；精氨酸激酶 和碱性磷酸酯酶活性明显下降。与同品系肌肉中的酶活相比，中肠内的酶活均表现出较高的活性。 本实验在分子层面上对AK基冈及其表达和AK蛋白表达进行了研究，并在棉铃虫生理方面 进行了的探索。这有利于棉铃虫AK分子水平的研究，并为棉铃虫的防治提供了理论基础。 关键词：棉铃虫，精氨酸激酶，启动子克隆，RealTime．PCR，RNAi，生理测定 Abstract Cotton oneofthe inthe bollworm,Helicoverpaarmigera(Hfibner)isimportantagriculturalpests world．Itnot harmsthe the and couon，also onlyseriously endangerscorn，sorghum,soybeanmany kindsof the factorin invertebrates，L-argininekinase(AK)isimportant energy crops．In regulation metabolism．1nherelatedresearchshowsthatAK an roleinthe of playsimportant processesadaptation environmental anddefenseof Bt Ac factors，immunitypathogen．UsingCrylsusceptible as clonedand theAK andits alsorelated materials，we H．armigera sequencedgene promotor,and functionofAK wasstudiedrealtime