紫外辐射和水杨浸渍对离体桑树枝条韧皮部中桑皮苷A水平的影响.pdfVIP

紫外辐射和水杨酸浸渍对离体桑树枝条韧皮部中桑皮苷A 水平的影响 摘要 中文摘要 本实验以桑树栽培品种 842 （Octoploid variety，即八倍体桑品种）的桑树枝条 韧皮部（简称桑枝皮）为实验材料，先采用醇-水提取，后经过大孔树脂(D101)、 葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20) 的吸附与分离进一步提纯，再利用半制备 HPLC-DAD 技术提取出主要活性单体成分，经过高效液相色谱二极管阵列(HPLC-DAD)检测和 与标准品紫外光谱比对分析，最后鉴定分离到的高纯单体为桑皮苷 A(mulberroside A) 。以制备的桑皮苷A 绘制线性方程定量分析待测样品中桑皮苷 A 的含量，线性 2 方程为y = 7535.64716 + 1508590x ，相关系数 R = 0.997。因此，在0.1-2.0µg 范围 内桑皮苷 A 浓度与其吸光度具有很好的线性关系。本文以此 HPLC-DAD 检测技术 为基础，对紫外辐射和水杨酸处理对离体桑枝条皮层中桑皮苷 A 的水平变化进行 了系统分析。 首先，本文对桑皮苷 A 的毒性进行了动物实验。用桑皮苷A 处理正常 ICR 小 鼠，采用尾静脉每天注射的方式，研究了桑皮苷 A 对小鼠生长与发育的影响。动 物实验表明，桑皮苷 A 处理(50mg/kg)后，样品处理组小鼠体重增加减缓，肝脏系 数增大，但统计分析表明与正常对照组的差异不显著；而样品处理组小鼠血清中 SOD 和 GSH-PX 水平均有所上升，与正常组没有显著差异；肝脏中 SOD 和 GSH-PX 水平均略有下降，但与正常组的差异不显著；而样品处理组小鼠血清与肝脏中总 蛋白含量明显增高，统计分析表明与正常组差异显著，但是仍在正常波动范围内； 观察肝脏 HE 染色切片，发现桑皮苷 A 处理后肝脏细胞出现轻微损伤。综合以上 结果显示，桑皮苷 A 对体重的增长和肝脏系数无明显影响；对血液和肝组织中各 项氧化指标无明显影响，但是对肝脏细胞有轻微损伤作用。 其次，我国蚕区每年会产生大量的桑枝，研究这些废弃桑枝的活性成分及其 高效利用具有重要的现实意义。桑皮苷 A 是一种氧化白藜芦醇二糖苷，是一种桑 树的次生代谢产物，在桑根和桑枝中都存在，具有多种生物活性和药理作用。为 了研究提高离体桑枝中桑皮苷 A 含量的方法，并且保证实验的准确性，所以以桑 树栽培品种 842 的桑枝为试验材料，选用相同位置的枝条，分别用紫外线辐射和 水杨酸进行处理。 用三种不同波长范围的紫外线（紫外ultraviolet C (UVC)、ultraviolet B (UVB) 、 ultraviolet A (UVA) ）对刚剪下来的新鲜 842 桑枝条进行辐射处理。结果显示，用 UVC 辐射处理 8 分钟时，桑皮苷 A 的含量达到最大(0.72µg/mg) ，达到处理前的2.2 摘要 紫外辐射和水杨酸浸渍对离体桑树枝条韧皮部中桑皮苷A 水平的影响 倍；用 UVB 处理仅 2 分钟后，桑皮苷 A 的含量最大(0.61µg/mg) ，达到处理前的 2.7 倍；而用 UVA 处理 6 分钟时，桑皮苷 A 的含量达到最大(0.48µg/mg) ，达到处 理前的 1.2 倍。这些结果表明，三种紫外光辐射都能明显刺激桑枝皮层的细胞，促 使皮层细胞分泌桑皮苷 A 增加。其中紫外波长 290-320nm 范围的 UVB 辐射处理 对桑皮苷 A 含量增加的效果最显著。 分别以不同浓度的水杨酸浸泡不同时间对刚剪下来的新鲜 842 桑枝条进行处 理。当在60µg/mL 浓度的水杨酸中浸泡 80s，其桑皮苷A 含量升高最快(0.64µg/mg) ， 达到处理前的 2.1 倍。当缩短浸泡时间(20s)和提高浓度(80µg/mL) 同样可以提高桑 皮苷 A 的含量 2.0 倍(0.62µg/mg) 。这说明水杨酸处理对桑枝皮层的细胞也有显著 的刺激作用，从而促使皮层细胞分泌桑皮苷A 增多。 此外，同一根枝条上下不同部位皮层中桑皮苷 A 的含量差异非常明显，枝条 顶部嫩皮层含量很低(0.14µg/mg) ，越到下部含量越高，含量高达 15 倍。桑枝条剪 伐的时期对紫外辐射和水杨酸处理的效果也有很大的影响，剪伐的时期越晚