紫球藻藻红蛋白因的克隆及表达.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 藻红蛋白可作为天然色素应用于食品和化妆品工业，还可以作为光敏剂和荧光 cruentum)藻红蛋白 探针广泛应用于医药行业。本论文主要从紫球藻(Porphyridium 亚基基因的克隆，该亚基基因在巴斯德毕赤酵母和大肠杆菌BL21中进行异源表达等 方面开展研究。主要实验结果如下： 在本课题组吴义诚已克隆出藻红蛋白13亚基的基础上，利用LA．PCR技术扩增 列长1134 PE)亚基基因编码区无内含子序列。利用生物信息学的方法对a亚基的氨基酸序列， 氨基酸组成，疏水作用，二级结构和三级结构等方面进行了初步的分析和预测。结 果显示，预测的藻红蛋白a亚基结构与不同来源的藻红蛋白a亚基结构十分吻合， 同时它的结构特征也满足于捕光蛋白的特性。 藻红蛋白a、13亚基分别亚克隆到毕赤酵母表达系统pPIC9K和大肠杆菌表达载 分别转入Pichiapastoris 发现表达量过低。将藻红蛋白a、13亚基分别克隆到pET28a载体上，再分别转入 E．coli 13亚基在大肠杆菌表达系统中主要以包涵体的形式存在。 显著的偏好性，偏爱于使用以A或T结尾的密码子。将藻红蛋白亚基基因与大肠杆菌、 毕赤酵母基因组的密码子偏爱性进行比较，结果表明，藻红蛋白亚基基因密码子用 法与大肠杆菌、毕赤酵母差异较大，若要实现该基因在以上宿主中的高效表达则需 对部分密码子进行改造。 关键词紫球藻，藻红蛋白，基因克隆，基因表达 Abstract Il●●l-_-_一 Abstract as usedinfoodandcosmeticsindustries Asanatural canbe pigment，phycoerythrin as inthe for andfluorescent well industryphotosensitizer widelyapplyedpharmaceutical this doned andthen in phycoerythrin(PE)subunitgene expressed probes．Inpaper,we and BL21 for resultswere Pichia Escherichiacoli heterologousexpression．The pastoris as follows： of onhis memberWu hasclonedsubunits Group Yicheng p phycoerythrin，base subunitand LAoPCR，then p，a intergenicregionby results，amplifiedphycoerythrin 563