褶纹冠蚌超氧化歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究.pdfVIP

摘要 摘要 褶纹冠蚌(Cristariapl／cata)作为我国重要的淡水育珠蚌之一，易受病原体 感染而发生疾病，育珠能力产生了较大的影响，因此开展其分子免疫的研究具 有重要意义。超氧化物歧化酶(SOD)h～e清除生物氧化过程中所产生活性氧(ROS) 而对细胞具有保护作用。本研究对褶纹冠蚌icCuZnSOD基因进行了克隆和重组 表达载体构建，并对重组rCpSOD基因在大肠杆菌中进行表达和纯化，测定蛋 白活性及稳定性，并初步评估其功能。 ． 一- I、EcoR I双酶切之后，连接，构 eDNA全长，将基因和表达载体pET-30a经／q,n 同时加入或不加入cu2+／z．2+分别在37℃和20℃进行诱导，采用Ni2+亲和层析镍 纯化蛋白的方法，对包涵体和可溶蛋白分别进行纯化和活性测定，并考察活性 最高rCpSOD蛋白酶的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性。用rCpSOD 小鼠抗血清对诱导的融合蛋白进行Western-blot分析抗原性。最后建立乙醇损伤