酸性脲酶的制备纯化及其性质研究.pdfVIP

摘要 摘要 酸性脲酶因能够耐受酸性环境，并且在大部分的低乙醇度酒精饮料中仍具有很高的 活性，因而可以用来去除其所含有的尿素，从而降低酒精饮料中的氨基甲酸乙酯。本论 文主要对来源于Enterobacter sp．R．SYB082的酸性脲酶进行了提取、纯化及性质研究。 在细胞破碎阶段主要考察了高压匀浆法，结果表明在匀浆压力80MPa、匀浆3次、 菌体浓度1509／L的条件下破碎效果最佳，细胞破碎率达到了90％，酶活收率为110％。 在粗分离阶段应用聚乙二醇．磷酸氢二钾双水相体系对细胞破碎后的粗酶液进行萃 取，结果表明在聚乙二醇分子量为4000，聚乙二醇浓度为15％，磷酸氢二钾浓度为10％， 体系pH值6．0，NaCl浓度4％时，酸性脲酶的收率达到了83％，纯化倍数为4．5。 倍数为9．18。SDS．PAGE电泳为单一条带，其N端8个氨基酸残基序列为： 之间酶有较好的热稳定性，相对酶活都在80％以上。当酶液在较高温度(65℃)时，保 和1099mol 制作用，酒石酸、琥珀酸对酶有一定的激活作用，草酸、乙酸有一定的抑制作用。在两 种不同的黄酒中按照0．05U／mL的