c-Abl调节变剪接及无义突变介导的mRNA降解.pdfVIP

摘要 摘 要 c—n6，是Abelson鼠白血病病毒原癌基因弘口6，在细胞内的同源物，广泛表达 于哺乳动物细胞中【l】o其编码产物c．Abl属于非受体酪氨酸激酶家族(non．receptor 够rosine 结合区、核输出信号区呷S)等。 DNA损伤反应如离子辐射、顺铂等通过A1M或DNA．PK途径激活细胞核 中的c-Abl，诱导细胞周期停滞。在紫外线和耵盯．a诱导的应激损伤反应中，c．Abl 通过与11cB嘎的相互作用诱导细胞凋亡。 related Abelson超家族还包括另一个成员，AbI相关基因A唱(abelsongene)。 A唱和c．Abl高度同源。 前期研究显示，c．Abl能够与某种剪接因子相互作用，提示c．Abl可能参与 调控细胞中的可变剪接过程。 真核生物前体RNA除去内含子连接外显子获得成熟mRNA的过程称为剪接 (splicing)。在剪接过程中通过选择不同的剪接位点而产生不同的mI矾A异构体， 即可变剪接(altemativesplicing，AS)。可变剪接是由一种称为剪接体的复合物执行 种信号精确识别剪接位点完成剪接过程。 可变剪接是基因调控和蛋白质多样性的重要机制，受到多种顺式元件和反式 因子的调节。 AS可以产生新的蛋白质，改变蛋白质的结合特性，酶活性，细胞内定位， 信号传导功能以及稳定性等。异常的AS可能导致相关疾病的发生。 AS可以使mRNA的阅读框发生改变，产生提前终止密码子(preln狐lrc temination atI耐 mRNA decay)途径得到降解。NMD也是调节基因表达水平的方式，可以作为一 种监督机制，使含有PTC的mRNA在翻译成功能缺失的截短蛋白而可能对细胞 造成毒害之前就被清除掉，避免对细胞造成损害。 MCF．7稳定突变株，将培养细胞提取总I矾A，应用A厨me廿iX外显子芯片检测 突变株和野生型细胞中全基因组的剪接变化。经过一定的数据处理步骤，筛选若 干重要的基因用ImPCR方法进行验证，获得了发生可变剪接的基因，初步证实 c．Abl对可变剪接的调控作用。对发生可变剪接的基因做了初步的功能探讨，并 分析了其可变剪接与c．Abl之间的关系。 摘要 在受调控的基因中，发现了3个基因新的可变剪接异构体，其中IL4R、 PSMBlO以及S砌uvIl／SRml60通过可变剪接使阅读框发生移码而产生提前终止 temination 密码子(premanIre rctention)，从而使原来的编码框发生改变，出现提前终止。 PTC剪接异构体的表达，结果显示，在人源细胞MCF．7中，c—Abl的敲低(KD) 的剪接与c-Abl是相关的。 卜MD机制被降解。进一步研究发现，该”PTC+mRNA”在293细胞中具有细胞周 期特异性，G1期表达量最高，而在S期及G2／M期较低。 我们还分析了21个已经被证实可以通过NMD降解含PTC剪接异构体的小 鼠基因，然后在DKo／MEF细胞中进行验证。结果显示，相对于野生型MEF， 在c-Abl和A喧双敲除的DKO细胞中，多达lO个基因含有PTc的剪接异构体 表达量都有显著的上升，说明c．Abl参与调节基因”PTc斗m砌妣一的剪接过程，甚 至参与调控NMD过程，进一步证明了c．Abl对可变剪接的调节作用。 关键词：c．Abl，外显子芯片，可变剪接，无义突变介导的mI斟A降解 2 Abstract c一口6，is廿lecellular of oftheAbelsonmurine homologthe卜口6，oncogene leukemiaVilllsandis inmammalceIls．The ubiquitouslyexpressed