二色补血草几丁酶基因chi31和chi32原核表达及重组酶分析.pdfVIP

摘要 摘要 Ec．3．2．14)是一种能降解几丁质及其衍生物的糖基水解酶，它 几丁质酶(chitinase 能催化真菌细胞壁的重要成分…几丁质的水解，从而抑制真菌的生长增殖，提高植物的 抗真菌能力，它广泛存在于各种微生物、植物及动物细胞和组织中，参与多种生理过 程。几丁质酶在生物防治和几丁质资源的利用等方面具有巨大的应用潜力，因而受到了 广泛的重视。 术研究了立枯丝核菌胁迫条件下，两基因在二色补血草中的表达模式。结果表明， chi31和chi32基因能够应答真菌胁迫胁迫，两个内切几丁质酶基因对真菌病害的侵入均 有防御反应。并且在同一组织中，两基因在表达上存在时间上的先后；在不同组织中， 同一基因的表达量也存在差距。这说明，这两个基因可能在二色补血草中起到不同的作 用，或分别隶属于不同的生物学途径。 利用表达型载体pET-52b(+)研究两个几丁质酶基因的功能，分别构建原核胞内表达 载体pET—chi3 的阳性菌株。利用改良的Schales法对转化子的酶活力进行测定，证实了重组酶 测得的重组酶CHl32in发酵液粗酶活能达到0．792U。 为底物测得的重组酶CHl3 测得的重组酶CHl32ex发酵液粗酶活能达到0．897U。 在胞外原核表达中无论是在重组酶对真菌细胞壁的酶活还是对化合物的酶活都普遍 高于胞内原核表达的重组酶的酶活。在胞内原核表达中，重组酶CHl3lin对杨树叶枯病 这个结果也间接证明了胞外原核表达中的重组酶具有降解病原真菌细胞壁的潜力，为 降解能力也有待于开发。 摘要 本研究获得的重组酶的生产基因工程菌株可以用于林农业的防病抗病工程，而且利 用表达载体pET．52b(+)获得重组酶，能够减少病害防治的投入，降低林农业生产中的损 失。同时本研究还为今后将几丁质酶基因转入植物基因组提供了有力的依据。 关键词二色补血草： 几丁质酶； 生物防治； 酶学特性 Abstract akindof the of chitin，ail Chitinase(Ec．3．2．14)is glyeosidasecatalyzingdegredation constituentof cellwall．Chitinasehaverolesin the of important fungal suppressinggrowth and theresistantto in havereceived enhancing abilityfungal plants．Chitinase fungi pathogens increasedattentionbecauseoftheir inbiocontrolof potentialapplication and wellasinbioconversionofshellfishchitinwastes． fungipests，as Twochitinasechi31andchi32havebeenisolatedfromLimoniumbicolorand genes inGenBank埘mtheaccessionnumber1248and 1 deposited DQ43 DQ43 this oftwochitinaseto study，thetranscriptpatterns gene