三氧化二砷对Br-Abl耐药突变细胞株抑制作用及其作用机制.pdfVIP

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2015-11-02 发布于贵州
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三氧化二砷对Br-Abl耐药突变细胞株抑制作用及其作用机制.pdf

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1 j[1ll l II IIII III!filllIllflll Y1 目录 787360 、目录中文摘要……………………………………………………………………………………………．I 英文摘要……………………………………………………………………………………………．i 1引言………………………………………………………………………………………………………………………………1 1．1CML传统治疗………………………………………………………………………………3 1．2CML的治疗现状……………………………………………………………………………4 1．2．1酪氨酸激酶抑制剂的靶向治疗………………………………………………………。4 1．2．2异基因造血干细胞移植………………………………………………………………11 1．2．3其他能克服Imatinib耐药的靶向治疗………………………………………………．12 1．2．4三氧化二砷……………………………………………………………………………13 1．3前景展望……………………………………………………………………………………17 1．4研究的目的与意义…………………………………………………………………………17 2材料………………………………………………………………………………………………………………．19 2．1细胞株………………………………………………………………………………………19 2．2培养基及生化试剂…………………………………………………………………………19 2．3主要仪器和设备……………………………………………………………………………19 2．4抗体…………………………………………………………………………………………………………………20 2．5实时荧光定量PCR引物及试剂盒………………………………………………………．20 3方法……………………………………………………………………………………………．．21 3．1细胞培养……………………………………………………………………………………2l 3．1．1细胞复苏………………………………………………………………………………2l 3．1．2细胞传代………………………………………………………………………………．2l 3．1．3细胞冻存………………………………………………………………………………．2l 3．2台盼蓝拒染法测定细胞存活率……………………………………………………………22 3．2．1台盼蓝拒染法检测细胞对IM的敏感性……………………………………………．22 3．2．2台盼蓝拒染法检测细胞对ATO的敏感性……………………………………………23 3．3Realtime PCR法检测ATO作用于细胞后细胞内Bcr-Abl mRNA水平的变化………．．24 3．3．1 3．3．2 K562、K562R、KBM5、KBM5R mRNA的制备…………………………………一24 3．3．3 K562、K562R、KBM5、KBM5R eDNA的合成……………………………………25 3．3．4实时荧光定量PCR分析ATO作用细胞后Bcr-Abl mRNA水平的变化…………．25 3．4Western blot法检测ATO作用于细胞后Bcr-Abl蛋白水平的变化……………………．．26 3．4．1