PHA生物材料架对脐带间充质干细胞向成骨分化的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 大量的实验证明：聚羟基脂肪酸酯(PHAs，polyhydroxyalkanoates) 作为组织工程 的支架材料具有优越的应用前景，间充质干细胞 (MSCs, Mesenchymal stem cells) 在治疗 各种组织缺损和器官修复方面具有来源广、分离易、无免疫性、增殖分裂能力强，可以分 化为神经细胞、脂肪细胞、成骨细胞等多种分化能力。本论文将由人脐带沃顿胶质组织 （Wharton’s jelly ）分离所得的脐带间充质干细胞（UC-MSCs, umbilical cord mesenchymal stem cells ）植入到 PHA 生物材料家族的 PHBHHx 、P3HB4HB 和 PHBVHHx 支架内，将 UC-MSCs 诱导分化为成骨细胞，通过 CCK8 方法检测支架内细胞的增殖能力，采用对生 物材料物理性能的检测确定各种材料的机械性能，采用Von Kossa 和ALP 染色法和RT-PCR 分析法检测 UC-MSCs 向成骨细胞的分化，并且比较这三种PHA 生物材料支架在成骨组织 工程中的应用。 本论文将 UC-MSCs 植入 PHBHHx 、P3HB4HB 和 PHBVHHx 支架内培养不同的天数， 与在 24 孔细胞培养板内培养相比，支架对细胞生长有明显的促进作用，并且，PHBVHHx 对细胞生长的促进作用最强。通过对物理性能的检测表明：在这三种 PHA 材料中， P3HB4HB 的硬度最大，比较脆，PHBVHHx 最软，韧性最好，PHBHHx 介于两者之间。 Von Kossa 和 ALP 染色法显示：在 PHBHHx 、P3HB4HB 和 PHBVHHx 支架内，UC-MSCs 能够分化为成骨细胞，在支架内可见黑色钙沉淀和红色碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)的 表达。采用 RT-PCR 方法检测成骨分化特异性基因的表达也进一步证明：这三种 PHA 材料 能够支持 UC-MSCs 的成骨细胞。综上所述，PHBHHx 、P3HB4HB 和 PHBVHHx 支架具有 很好的生物相容性，能够促进 UC-MSCs 的生长和支持UC-MSCs 向成骨细胞的分化，其中 PHBVHHx 支架促进 UC-MSCs 生长的能力最强。然而，从物理性能上来说，P3HB4HB 材 料的硬度最大，适用于骨和软骨等组织的修复，而 PHBVHHx 材料的硬度最小，适用于软 体组织的修复。 关键词：成骨分化；间充质干细胞；聚羟基脂肪酸酯；支架 Ⅰ Abstract Abstract Polyhydroxyalkanoates (PHAs) have been shown to be good biomaterials in tissue engineering, and mesenchymal stem cells (MSCs) has widely source, Easily isolated, no immunity, good skills of division and proliferation and can differentiate to nerve cell, adipose cell, skeletogenous cells, and so on. In this study, human umbilical cord mesenchymal stem cells (UC-MSCs) were transplanted into the PHA biomaterial scaffolds and induced to differentiate into osteoblasts. CCK-8 analysis was performed to detect the cell proliferation, mechanical properties