HR对核受体VR靶基因调控机制的研究.pdfVIP

中文摘要 lysine proteins)的许多成员相继被鉴定为组蛋白赖氨酸去甲基化酶(histone protein)，在染 色质水平调控基因的转录与其它过程。Hairless(Hr)是这个家族中的一个成员， 生物信息学分析显示HR不太可能是一个组蛋白赖氨酸去甲基化酶。但是令人瞩 目的是，Hr基因的点突变在人和小鼠都会导致毛发的生长缺陷，表明HR蛋白 有着重要的生物学功能。有报道表明HR参与调控核受体(nuclearreceptor)VDR、 TR等的靶基因及与WNT通路功能相关，但其中的作用机制并不明确。已知VDR 的表达缺陷和WNT通路的功能异常也会导致毛发的生长缺陷，因此阐明HR与 核受体VDR及WNT通路的功能关系，将有助于为这类疾病的治疗提供生化依 据。HR蛋白在细胞内作用方式的阐明对解析Jumonji家族其它蛋白的功能亦会 有所帮助。 本文主要探讨了HR对核受体VDR靶基因的调控方式，并简单观察了HR 对WNT通路的作用。 细胞系的表达，发现HR在皮肤来源的细胞系如HaCaT和HeLa细胞及神经 来源的细胞系如SH—SY5Y细胞表达较高，在人胚肾细胞293T亦有表达，在 横纹肌来源的RD细胞几乎不表达。 2．免疫荧光显示在293T细胞，外源表达的flag．HR主要分布在细胞核内，而且 不是均匀分布的。构建了全长的人HR与EGFP的融合表达质粒，在MCF7 和293T细胞内观察到，在细胞分裂间期，HR在细胞核内表现为三种分布状 态，均匀分布、完全的点状和介于两者之间的形态；在分裂期，HR的分布 状态与纺锤体形状颇为相似，表现为在细胞核外的两个对称位置有荧光信号 的密集分布，并且两者之间有点状的荧光信号连接。 大鼠的CYP24A1启动子活性均有抑制作用，并且在用不同浓度的 1,25(OH)2D3诱导或不加药诱导时，抑制作用均存在。 的活性有较小的激活作用，这种作用在用lOuM的ATRA诱导或不用药诱导 时均存在。 性的抑制与VDRE序列密切相关。 4 6．免疫共沉淀实验提示HR与VDR蛋白之间有相互作用。 trichostatin 7．HeLa细胞中双荧光报告实验显示，20nM 抑制剂)，20mM adenosine dialdehyde(Adox，甲基转移酶的间接抑制剂)和10uM 的抑制作用，提示HR的功能不是通过改变组蛋白的乙酰化修饰，或者组蛋 白和DNA的甲基化修饰实现的。 是通过改变组蛋白的甲基化修饰实现的。 9．免疫共沉淀实验提示在HeLa细胞，外源表达的HR与内源的核受体共抑制 蛋白NcoRl(nuclearreceptor 位一致：HR的免疫共沉淀蛋白的质谱数据中NcoR的肽段覆盖率为13％， 三者结合可以提示HR与NcoRl蛋白在一个复合体中。 a在293T 细胞核内的定位呈互补分布，提示HR与ASH2L蛋白(被认为常常结合于活 化的染色质区)和异染色质蛋白HPla在细胞核内分布于不同的区室。 果，提示了HR对VDR的靶基因的抑制作用的可能机制。 LiCl TOPflash有较低的激活作用，在用或不用5-20mM 路报告基因super (GSrdl3的抑制剂，可以模拟wilt激活信号)处理时这种激活作用均存在。 5