c-src在原卵泡启动中的作用及其机制分析.pdfVIP

摘要 摘 要 目 的： 探讨c叮M及其蛋白在原始卵泡当中的表达、分布及其在原始卵泡生长发 育中的作用和机理。 方法： 石蜡组织HE染色、免疫组化、原位杂交，观察各级卵泡数及c1阳mRNA和蛋 白在其中的表达、分布及含量变化；用腺病毒包装c百形小干扰片断转染培养 blot 等方法检测RNA干扰及加入各种抑制剂后c1阳mRNA和Src蛋白的表达以及 检测RNA干扰及加入各种抑制剂后原始卵泡的发育情况。 结果： 1．随着培养天数的增加，原始卵泡在卵泡总数中所占比例逐渐减少；C-SrC mRNA在各组原始卵泡中均有表达，分布由卵母细胞胞浆逐渐扩散到卵母细胞和 颗粒细胞的胞浆中：同时，随着培养天数的增加，c百阳mRNA表达量增加。Src 蛋白在各组原始卵泡中均有表达，分布由卵母细胞和颗粒细胞的胞膜逐渐转变 为卵母细胞膜、颗粒细胞胞膜和胞浆中；同时，随着培养天数的增加，Src蛋 白表达量增加。 2．DNA测序检测大鼠卵巢中的c咯阳mRNART—PCR扩增产物序列(250bp)， 并与GeneBank中的序列比较，发现两者结果一致。 3．转染c吖阳siRNA后，用RT—PCR，westernblot方法检测靶基因c飞阳 表达，发现RNA干扰后，与空白组、空白载体组相比，最佳干扰组c叮阳mRNA 含量明显下降，原始卵泡在卵泡总数中所占比例相对更多，原始卵泡发育受到 抑制：而加入抑制剂各组c百阳mRNA含量无明显变化，但原始卵泡在卵泡总数中 所占比例也相对更多，原始卵泡发育同样受到抑制。 4．c叮阳siRNA及加入各种抑制剂后，c百陀最佳干扰组Src蛋白含量明显 摘要 明显变化：c叮陀最佳干扰组、LY294002组P13K蛋白含量明显减少，其余各组 P13K蛋白含量无明显变化。 结论： 1．c凇mRNA及蛋白在原始卵泡中有表达，其分布和含量随着培养天数 的增加而变化。 2．clrc在原始卵泡的发育中起重要的作用。 3．c叮阳能通过ERKl／2、PKC、P13K这几种信号通路促进原始卵泡的发育， 其上下游关系可能是：c1阳一p—P13K—p—PKC—p—ERKl／2。 关键词：C-S_rC；原始卵泡；RNA干扰；腺病毒：信号通路 要学科学术和技术带头人培养计划资助(2008) Abstract ABSTRACT OBJECTIVE： thevitalcenterofanimal follicleinitiationand are primordial growth aimofthis isto themechanismsaleunknown．The articleexplore reproduction，but the ofc—SrcmRNAand intheovariesas expression、distribution protein and roleandmechanismsofc—Srconthe follicle the primordialdevelopment of follicle． growthprimordial METHODS：． invitroWaSestablishedinthis 1．Theculture of follicles systemprimordi