crylIa8因和GsHLP2基因转化玉米自交系的研究.pdfVIP

摘要 舅曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼量曼曼皇曼曼皇曼曼!曼婪曼曼鼍曼曼鼍曼曼舅曼曼寰曼皇皇量鼍曼量曼曼皇寰曼量鼍曼曼曼曼曼篁!曼篁寰曼曼舅皇曼曼曼曼曼皇舅曼!曼舅曼曼曼皇曼 摘 要 玉米是世界上重要的粮食作物和饲料作物，但由于玉米中赖氨酸含量偏低，致使玉米中 蛋白质的实际利用率只有40％．50％。同时随着人们生活水平的提高、膳食结构的改变，对 玉米蛋白品质的要求越来越高。另一方面，由于虫害的发生，玉米产量遭到极大的损失，其 中以玉米螟危害最重。通过基因工程方法将高赖氨酸蛋白基因和抗虫基因转入玉米中，从而 改善玉米的蛋白品质，降低虫害对玉米产量的影响具有重要的意义。 本实验选取7个玉米自交系进行愈伤组织诱导，以诱导出的较好的胚性愈伤组织为受 体，利用农杆菌介导法对其进行遗传转化，将分别带有高赖氨酸蛋白基因GsHLP2、抗虫基 为通过转基因植株后代的遗传分离培育无选择标记的转基因玉米提供材料。 主要研究结果如下： 1．抗虫基因crylIa8植物表达载体的构建 构建了由带有内含子的组成型强启动子Ubi调控的crylla·箩基因植物表达载体，用于农杆 菌介导法转化。 2．农杆菌介导的玉米自交系遗传转化体系的建立 对7个玉米自交系和4种培养基组的合进行筛选，选择出了最适合诱导愈伤组织的自交 系、培养基组合。其中B73(N6)和HiIIB(NB)组合的初始愈伤诱导率和胚性愈伤诱导 都优于HiⅡB(NB)组合，故选择B73的愈伤组织作为遗传转化受体。 对B73玉米胚性愈伤组织农杆菌介导的转化体系进行了优化，确立了较为较优的转化条 玉米胚性愈伤组织的双丙氨磷筛选压为2mg／L。 3．转基因玉米植株的筛选和鉴定 用农杆菌介导法对B73t米自交系胚性愈伤组织进行转化，得到了160株再生植株，经 PCR阳性，4株crylla8基因PCR阳性。 关键词转基因玉米；抗虫基因；高赖氨酸基因：共转化；无选择标记 ansformationof GsHLP2 crylIa8 to gene：and gene Maize inbred lines Abstract Maize(Zea all MayaL．)is cereal importment intheWOIrld chinais crop thesecond today,and largest inthe corn‘producing country thelow world．However,becz【usecontentof inthe lysine maize，theactualutilization of inthemaizeis protein 409／0—50％．Withthe only of