DsbC对植酸体外折叠及功能影响的研究.pdfVIP

● 胺 kD：kilo Dalton，千道尔顿 。’ LB：Luria．Bertani medium，LB培养基 OD：opticaldensity,光密度 PAGE：polyacrylamidegelelectrophoresis，聚丙烯酰胺凝胶电泳 chain reaction,聚合酶链式反应 PCR：polymerase SDS：sodium sulfate，十二烷基磺酸钠 dodecyl TCA：trichloroacetic acid，三氯乙酸 TEMED：N’，N’，N’，N’-tetramethylethylenediamine，N’，N’，N’，N’一四甲基乙 二胺 mol／L：moles litre，摩尔每升 per 目录 中文摘要………………………………………………………………………1 Abstract………………………………………………………………………………………………．·3 1前言…………………………………………………………………………．5 1．1蛋白质的折叠……………………………………………………………．5 1．1．1蛋白质折叠的概述……………………………………………………．．5 1．1．2蛋白质的体外折叠………………………………………………………6 1．1．3蛋白质去折叠的研究……………………………………………………7 1．1．4蛋白质的再折叠研究……………………………………………………8 1．1．5蛋白质折叠过程与二硫键的形成……………………………………．14 1．2蛋白质折叠的辅助因子…………………………………………………15 1．2．1分子伴侣………………………………………………………………15 1．2．2折叠酶…………………………………………………………………16 1．2．3二硫键异构酶及其生物学性质………………………………………17 1．2．4 Dsb家族蛋白与DsbC…………………………………………………18 1．3植酸酶的概述……………………………………………………………22 1．3．1植酸酶的结构…………………………………………………………22 1．3．2植酸酶分子中的二硫键………………………………………………23 1．4本研究的目的意义………………………………………………………24 2材料与方法………………………………………………………………．．25 2．1实验材料…………………………………………………………………25 2．1．1菌株与质粒……………………………………………………………25 2．1．2主要工具酶及试剂……………………………………………………25 2．1．3主要实验仪器…………………………………………………………25 2．2主要试剂的配制…………………………………………………………25 2．2．1碱裂解法提质粒的相关溶液…………………………………………．25 2．2．2植酸酶活性及蛋白含量测定过程中相关溶液的配制………………26 2．2．3 SDS．PAGE缓冲液的配制……………………………………………“27 2．2．4蛋白提纯过程中相关溶液的配制……………………………………．27 2．2．5亲和层析中相关溶液的配制…………………………………………．28 I 2．3实验方法…………………………………………………………………“ 2-3．1 dsbC基因的扩增、克隆及序列测定………………………………… 2．3．2DsbC的原核表达……………………………………………………… 2．3．3原核表达DsbC的纯化………………………………………………” 2．3．4植酸酶的分离纯化及酶活性测定……………………………………· 2．3．5植酸酶的去折叠和再折叠实验………