5-FU和MG32选择性调控NKG2D配体表达及其机制初步研究.pdfVIP

5．Fu和MGl32选择性调控NKG2D配体表达及其机制初步研究 摘 要 NK细胞是天然免疫的主要承担者，在肿瘤免疫、抗病毒感染及清除非己细胞中发挥重 要作用¨训。与T细胞不同的是，NK细胞的细胞毒作用不受肿瘤细胞的MHC．I类分子的限 制，其细胞活性的发挥是其表达的各种受体分子与相应配体相互作用的结果。 NKG2D(NK2，member group D)为NK细胞表面活化性受体，属C型凝集素超家族成员。 classI．related 分T细胞订1。NKG2D的配体为MHC．I类相关分子(MHCmolecules，MICs)， 蛋白酶作用而从细胞表面脱落‘鲫。MIcs为“诱导型’’细胞表面抗原¨D·1¨，近年的研究‘121 发现许多因素，如细胞应激、热休克、感染、DNA损伤和转化等均可上调它们的表达，病 毒miItNA、基质金属蛋白酶等可影响NKG2D配体的表达‘陆171。 研究表明，由于肿瘤细胞的MHC．I类分子丢失或变异。使得特异性MHC限制性的细胞毒 溶解肿瘤细胞的免疫反应中发挥关键的作用¨8’191。NKG2D通过与靶细胞表面诱导产生的 相应配体结合，然后结合转接蛋白向NK细胞传递活化信号，挑细胞获得攻击靶细胞的能 活化决定了机体的抗肿瘤细胞免疫水平。 文献报道DNA损伤反应可以通过诱导NKG2D配体的上调来增加肿瘤细胞对NK细胞的 敏感性‘21。24’，因此激活DNA损伤反应的药物／治疗方法(如放疗、化疗)和NK细胞治疗联 合应用，有可能减少药物的副作用，提高肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性，提高抗肿瘤效 果。 目前，化疗联合基于NK细胞的免疫治疗在临床上应用广泛，但化疗对NK细胞抗肿瘤 活性的调节机制，尤其是对NKG2D介导的杀伤机制是如何调节的还不甚清楚。为什么同一 个NKG2D受体在细胞上存在多种不同的配体?它们的作用有何差异?表达调控上有何不 同?不同的化疗药物所造成的损伤不同，其调控NKG2D配体表达的通路差异是什么?虽然 NKG2D配体编码区有一定保守性，但其5’非翻译区同源性很低，提示不同刺激或病变对不 同的NKG2D配体的表达调控可能是特异的。 因此，本研究以肺腺癌A549细胞系为模型，研究不同作用机制的抗代谢抗肿瘤药5．FU 响，并探讨其可能的调控机制。 5．FU和MGl32选择性调控NKG2D配体表达及其机制初步研究 目的：研究5．FU和MGl32对A549细胞NKG2D配体表达的调控及其机制。 运用双荧光报告基因系统进行启动子活性分析。用MTT法检测了不同浓度5一Fu和MGl32 MGl32处理对MICA饵启动子活性的 对A549细胞的抑制率；测定了300“M5．FU、10¨M 况；WeStem DNA损伤反应通路分子抑制剂对5．FU和MGl32诱导NKG2D配体表达作用的影响。 结果：克隆了人MlCA、MICB的启动子及其五个截短体基因并测定了启动子基础活性。 可使A549细胞DNA发生损伤，彗星法(碱性裂解法)可观察到明显的拖尾现象，而且5．FU ULBP2和MICB的表达上调。 达的调节可能与Chl(2的磷酸化水平增加有关。 关键词：5．Fu；MGl32；NKG2D配体；表达调控；A549 2 5．FU和MGl32选择性调控NKG2D配体表达及其机制初步研究 TheselectiVe ofNKG2D5一FUandMGl32 by regulation 1igands Abs仃act NKcellsare eff-ectorcellsofinnateimmune rolein major tumor infectionandrcmovalof‘non．selfcells【1一钉．ThedifrerencebetweenT i