8-细胞期胚胎射检测小鼠诱导多能干细胞的全能性.pdfVIP

摘要 嵌合体和四倍体补偿小鼠的制作是鉴定细胞系具有分化全能性最为严格的标准，在 Stem 诱导多能干细胞(Induced CellS，iPSC)的建系和转基因小鼠的获 Pluripotent 得上处于重要地位。本实验用CFl小鼠胎儿成纤维细胞作为滋养层细胞，用带有Oct4 GreenFluorescent 启动子表达绿色荧光蛋白(Enhance 或4n胚胎发育至8一细胞期时，利用显微注射技术，将带有绿色荧光的单个iPS供体细胞 注射入CDI受体胚胎中，由此，我们获得了嵌合体胚胎。体外培养嵌合胚至囊胚期，比 较内细胞团中的荧光面积和总面积，获得嵌合胚的囊胚嵌合率。将发育到囊胚期的嵌合 体胚胎通过胚胎移植手术移入假孕母鼠子宫内继续发育，直至嵌合体小鼠出生。本实验 鉴定以及核型分析，均为阳性，且染色体数目』下常，说明此细胞系具有一定的多能分化 潜能，可以尝试做嵌合体实验。实验过程中，共注射胚胎497枚，其中2n胚胎274枚， 16枚，成囊胚率52．O％。对 成囊胚183枚，成囊胚率66．8％；4n胚胎223枚，成囊胚1 发育至囊胚的嵌合体胚胎，分别随机选取2n／2n与2n／4n嵌合胚各10个，按照面积比 方法计算嵌合胚的囊胚嵌合率，平均结果均在70％以上(2n／2n胚胎：86．O％±8．4％， 母鼠子宫内，尚未见嵌合体小鼠出生。结果表明：1、用8一细胞期单细胞注射的方法可 布着仍含有能表达Oct4基因而保持多能性的细胞。 关键词：胚胎，嵌合体，8～细胞期，iPS细胞，显微注射 Abstract Productionofchimericand miceisthestricteststandardtO tetraploidembryocomplementation cell in validatewhether ofa line．The usedthis wereCFImouse totipotencygiven trophoblasts study fibrolastcellsand werederivedCDImouse iPScells embryos，while embryo recipentembryos origined fromC57mousewhichcarriesa fluorescent Oct4 green through protein(EGFP)expressing as to8-cell a donoriPScell useddonorcells．When stage，weinjected recipentembryosdeveloped single fluorescentintoCDI tOachievechimeric chimericrate expressinggreen embryos embryos．Blastosphere Wasexamined ofthefluorescenceareaan