AP2ERF转因子与水稻产量相关基因LRK6等位基因的表达差异.pdfVIP

复旦大学博士论文 水稻LRK6等位基凶的顺式渊控 摘 要 为了更有效的通过遗传工程的手段进行育种，至关重要的一点就是分析清楚 基因的功能及其表达调控。我们实验室先前的工作中，通过图位克隆的方法从以 sativa 东乡野生稻(OryzarufipogonGriff．)为供体与以桂朝2号(OryzaL．ssp． 实验证明这个QTL位点促进水稻谷粒子增加从而对产量的贡献率达到16％。基 因结构分析表明这个QTL位点由三R朋．LRK8(1eucine．richrepeatreceptor-like kinase，ZRh3，八个编码富含亮氨酸重复序列型类受体激酶新基因所组成的基因 sativa 簇。有趣的是，我们发现该LRK家族基因在粳稻日本晴(OryzaL．subsp． Japonica sativa vat：．93．11)的 IJaF．Nipponbare)；gl籼稻93．11(OryzaL．subsp．Indica 杂交后代中存在等位基因表达差异的现象。LRK家族基因巾的一员，LRK6基因 在籼粳杂交后代中来源不同亲本的等位基因均有表达，但是对于该后代中LRK6 基因总转录水平的贡献却不一致。在亲本中，日本晴中的LRK6基因的表达量远 远高于93．11中。在籼粳杂交后代巾，来源于不同亲木的LRK6等位基因于其在 亲本中的表达量相似。这种现象，我们推测是由于等位基因启动子顺式元件所造 成的。通过对LRK6启动子的递减分析，我们发现有两个启动子区域对LRK6基 因的表达存在明显影响。序列比对分析显示这两个区域的序列在籼稻93．11、粳 稻日本晴和东乡野生稻中存在差异。其中一个启动子区域，我们命名为DSLP2 ofLRK6Promoter (DifferentSequence 2)，可能具有潜在的转录因子结合位点。使 用酵母单杂交的方法，我们获得了一个乙烯响应因了(ERF)蛋白与该片段互作。 序列分析和GCC．box互作分析说明，这是一个乙烯响应转录因子基N(OsERF3)， 属于ERF家族的第二类转录因子，除含有一个ERF域之外，还有一个具有抑制 下游基因表达功能的EAR域。我们通过碱基突变实验确定OsERF3基因与DSLP2 区域中的一个未报道的元件(5’．TAA(A)GT-3’)互作。激素处理实验和伪职乃基 因过量表达实验结果显示，OsERF3基因可能直接抑制93．11中的LRK6基因的 表达，但是对日本晴的LRK6基因的表达没有明显的直接抑制。所有实验的结果 综合来看，OsERF3基因，一类乙烯响应的转录因子，与水稻LRK6基因启动子 上的元件互作，很有可能导致了籼粳杂交后代中来源不同亲本的等位基因表达差 异的现象。为进一步研究水稻产量基因的调控和了解植物杂种优势的机理，做出 了一些新的尝试。 关键词：水稻，递减分析，差异表达，乙烯响应因了(ERF)，抑制了，TAA(A)GT 元件。 复旦大学博士论文 查塑!坐篁垡墨鬯丝坚茎型笙 ． Abstract isimportant To efficient engineeringtechniques，it practice breedingthroughgenetic and ofthe to thefunction regulationgene．Wepreviously identify expression cluster leucine—rich