Anti-CD8 scFv-CH3-KCCYSL的分子克隆、表达及活性鉴定.pdfVIP

摘要 摘要 本研究旨在对抗CD28的单链抗体进行人源化改造，并连入具有肿瘤靶向作用的寡肽 KCCYSL，以期获得具有刺激T细胞增殖和靶向肿瘤双重作用的融合蛋白。 在先前的研究中，我们运用核糖体展示技术筛选出了一株抗CD28的单链抗体 (anti—CD28 scFv)。但它缺少Fc片段，在体内的半衰期短，很容易从血液中清除，而且在 鉴定方面也存在困难。为弥补这一不足，我们首先提取出人外周血单个核细胞的总RNA， PCR连接到anti—CD28scFv基因 然后运用RT．PCR扩增出IgGlCH3基因，再运用SOE 上，得到s．C基因。 为了获得靶向肿瘤的功能，我们运用SOE coli anti．CD28 疗提供了基础。 关键词：anti—CD28scFv，T细胞增殖， 肿瘤靶向 CH3，KCCYSL，Her2， IgGl III 摘要 Abstract Inthis anti—CD28scFvwashumanizedwithhumant s-C domain，and study,the IgGCH3 gene obtained．The wasconnectedwith thecombinanteds-C—Kwas oligopeptideKCCYSL，then gene fusion s-C-Khaddoublefunctionsof ofTcellsand Her2·- protein inducingproliferation targeting tulnoL overexpressing Ananti-CD28seFvWasselectedribosome inour it displaytechnology using previousstudy．But willbecleared invivoandhardto intheabsenceofFe this r印idly idemify fragment．Instudy, totalRNAwas isolatedfrommononuclearcellsofhuman CH3 peripheralMood，then，IgGlgene was reverse Ca3 wasconnected amplifiedby transcripfion-PCR(RT-PCR)．Theamplifiedgene withanti—CD28 scFvS