EIA突变体腺毒载体的构建及其对肿瘤细胞生长影响的初步研究.pdfVIP

摘要 摘要 自上世纪初，人们提出利用病毒治疗肿瘤以来，病毒开始广泛地应用于肿瘤治疗。 目前腺病毒成为肿瘤基因治疗中研究最多，应用最广泛的病毒载体，原因在于其具有以 下特点：宿主范围广泛，可感染处于分裂和非分裂期的细胞，不整合入染色体基因组， 无插入致突变性，易操作，易纯化，致病性低且病毒滴度高等。然而腺病毒在肿瘤治疗 中也存在一些问题，如靶向性差，某些细胞中感染效率低等。因此，人们开始对腺病毒 的结构进行以下改造：特定位点的点突变，某基因片段的缺失突变及在上述两种方法基 础上肿瘤治疗基因的插入等。至今，人们对腺病毒的结构和功能有了较深的认识，但是 这大多集中在保守区的研究上，如腺病毒早期基因EIA的保守区CRl、CR2和CR3， 而对保守区之间的非保守区的结构和功能及其对保守区的影响了解较少。 为此本研究对E1A进行缺失突变，并研究突变EIA能否与l强结合，及该腺病毒突 变体对肿瘤细胞生长的影响。将编码腺病毒E1A蛋白111．120位氨基酸残基的核苷酸缺 失突变，并在该基因上游插入绿色荧光蛋白报告基因构建增殖型腺病毒载体 载体的EIA均受人端粒酶启动子(hTERTp)的调控，可在端粒酶阳性的细胞中表达。 基因，免疫共沉淀实验检测到突变E1A具有与Rb结合的能力，病毒增殖实验和流式细 能力，与对照病毒相比，其还能促进A549细胞更多地进入S期。 关键词：肿瘤细胞，腺病毒载体，EIA突变体，端粒酶启动子 Abs仃act Abstract the forcancer viruseswas last Sincetreatment using early century，viruses presented becomeoneofthe havebeen usedforcancer have widely therapy．Currently，adenoviruses studiedand used reasonsforwhichareas vectors，the follows， intensively widelygene adenovirusesthe toinfect and into have doesn’t abifity dividingrestingcells，they integrate the whichavoidsinsertionmutationsand are tobe additionto genome they easy operated，in theirlow and aresome about hi【曲fiters．However，there pathogenicity disadvantages adenovirusesincancer andlowtransfectedin therapy，forexamplepoortargeting efficiency some anumberof